RNA变性电泳法检测RNA质量

采用RNA变性电泳法检测RNA质量,方法如下: ⑴ 凝胶制备： 制备1.2%琼脂糖凝胶（电泳槽体积为50ml） ① 称取0.6g琼脂糖，加入43.5ml水，加热溶解并降温到60℃。 ② 加入5ml 10×甲醛变性电泳缓冲液，并加入1.5ml 37%的甲醛，混合均匀。 ③ 倒入电泳槽中制胶（甲醛有毒，制胶应在通风橱中进行）。 ⑵ RNA模板准备（5~7.5μg total RNA） ① 制备如下混合液 （9.7μl） 10×甲醛变性电泳缓冲液： 1.25μl 37%的甲醛： 2.2μl 甲酰胺： 6.25μl

② 加入2.8μl RNA，使总体积达到12.5μl ③ 混合后离心5~10 sec（1 000~2 000 r/min） ④ 55℃加热15 min ⑤ 加入2.5μl甲醛凝胶加样缓冲液，再加点EB（约0.2~0.5μl），混合后离心5 sec ⑥ 将样品加入点样孔 ⑦ 在5v/cm的电压下电泳至溴酚蓝带跑到电泳槽中央（20cm长电泳槽，用95v电压，1小时左右）