组织和细胞RNA的制备：TRIzol法

TRIzol RNA提取试剂盒是由GIBCO BRL公司推出专供提取RNA的产品，其操作方便、快捷。

（一）试剂准备

1. TRIzol试剂。

2. 氯仿

3. 异丙醇

4. 75%乙醇（DEPC H2O配制）

5. DEPC H2O

（二）操作步骤

1. 样品处理：

（1）培养细胞：收获细胞1-5×107,移入1.5ml离心管中，加入1ml Trizol,混匀，室温静置5min。

（2）组织：取50-100mg组织（新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可）置1.5ml离心管中，加入1ml Trizol充分匀浆，室温静置5min。

2. 加入0.2ml氯仿，振荡15s，静置2min。

3. 4℃离心，12000g×15min，取上清。

4. 加入0.5ml异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10min.

5. 4℃离心，12000g×10min，弃上清。

6. 加入1ml 75%乙醇，轻轻洗涤沉淀。4℃，7500g×5min，弃上清。

7. 晾干，加入适量的DEPC H2O溶解（65℃促溶10-15min）。

（三）注意事项

1. 样品量和Trizol的加入量一定要按步骤（1）的比例，不能随意增加样品量或减少Trizol量，否则会使内源性RNase的抑制不完全，导致RNA降解。

2. 实验过程必须严格防止RNsae的污染。