PI(PropidiumIodide 碘化丙啶)染色
原理
荧光显微镜观察
1.收集细胞,PBS 洗涤细胞一次,2000 rpm 离心 5 分钟,用 PBS 重悬细胞,调整细胞浓度约为 106 个/ml;
2.取 100 μl 细胞悬液,加入 2-10 μl PI 染液,轻轻混匀;
3.4℃ 避光放置 5 min 后,滴加于载玻片上,加盖玻片;
4.荧光显微镜检测。
流式检测:
1.收集细胞,PBS 洗涤细胞一次,2000 rpm 离心 5 分钟,用 PBS 重悬细胞,调整细胞浓度约为 106 个/ml;
2.500 μl 细胞悬液中加入 5 μl PI 染液;
3.4℃ 避光放置 30 min;
4.流式细胞仪检测。
材料与仪器
【器材】一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,离心机
【试剂】PI 染色液
【材料】细胞
步骤
荧光显微镜观察
1.收集细胞,PBS 洗涤细胞一次,2000 rpm 离心 5 分钟,用 PBS 重悬细胞,调整细胞浓度约为 106 个/ml;
2.取 100 μl 细胞悬液,加入 2-10 μl PI 染液,轻轻混匀;
3.4℃ 避光放置 5 min 后,滴加于载玻片上,加盖玻片;
4.荧光显微镜检测。
流式检测:
1.收集细胞,PBS 洗涤细胞一次,2000 rpm 离心 5 分钟,用 PBS 重悬细胞,调整细胞浓度约为 106 个/ml;
2.500 μl 细胞悬液中加入 5 μl PI 染液;
3.4℃ 避光放置 30 min;
4.流式细胞仪检测。
注意事项
●本染色液用于细胞染色分析,也可用于石蜡切片、冰冻切片、细胞涂片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。以下以培养细胞的荧光显微镜检测为例,细胞染色可用预冷的 70% 的乙醇固定,4℃,1-2 小时,也可不固定,其他方法请参阅相关资料。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
●染色后请尽快检测。
●染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。
● PI有毒,操作时要戴上手套。
● 流式检测细胞凋亡时,其 DNA 可染性降低被认为是凋亡细胞的标志之一,但这种 DNA 可染性降低也可能是因为 DNA 含量的降低,或者是因为 DNA 结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。在分析结果时应该注意。
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