PCR反应仪器、耗材的重要性

PCR基本原理：

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构 成：

①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结 合，为下轮反应作准备；

②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结 合；

③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对 与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。

每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因 扩增放大几百万倍。

反应条件一般为：

变性温度和时间 95℃，30s

退火温度和时间 低于引物Tm值5 ℃左右，一般在45～55℃

延伸温度和时间 72℃，1min/kb(10kb内）

Tm值=4(G+C) +2(A+T)

循环次数 ：一般为25 ～ 30次。循环数决定PCR扩增的产量。模板初始浓度低，可增加循环数以便达到有效的 扩增量。但循环数并不是可以无限增加的。一般循环数为30个左右，循环数超过30个以后，DNA聚合酶活性逐渐达到饱和，产物的量不再随循环数的增加而增 加，出现了所谓的“平台期”。

PCR反应中耗材和仪器的重要性：

因PCR反应的精密度，使得在此过程中，耗材和仪器的辅助作用非常重要，如Tip的准度和残留度；PCR tube的密封性及热敏感度；所有耗材的外源DNA/RNA酶以及细菌的污染程度；以及在此过程中仪器使用的便捷度等，都是我们要考虑的因素。所以选择合适的耗材也是实验成功和便捷的重要因素。

PCR相关耗材：

10ul/200ul tip

10ul/200ul 枪头掀盖盒

8连排PCR tube 100ul/200ul

12连排PCR tube 100ul/200ul