RT中Olig（dT）15引物与随机引物？
RT实验Olig（dT）15引物合成的条带明显优于随机引物，不是随机引物的效果较好吗？怎样解释这种现象网友一回答：Olig（dT）适合于长链甚至全长mRNA的R
RT实验Olig（dT）15引物合成的条带明显优于随机引物，不是随机引物的效果较好吗？怎样解释这种现象 网友一回答： Olig（dT）适合于长链甚至全长mRNA的RT，要求RNA必须有Poly A，所以真核生物的mRNA都适用，对RNA样品的质量要求较高，最好不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。 随机引物 适合各种RNA的RT，尤其适合短链mRNA和模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。一般建议每5μg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5μg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（＜500bp）的增加和长片断、全长产物的降低。 总的来说，二者各有利弊。最好做预实验时就试验一次，选择最佳的引物。 网友二回答 Olig（dT）适合于长链甚至全长mRNA的RT，要求RNA必须有Poly A，所以真核生物的mRNA都适用，对RNA样品的质量要求较高，最好不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。 随机引物 适合各种RNA的RT，尤其适合短链mRNA和模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。一般建议每5μg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5μg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（＜500bp）的增加和长片断、全长产物的降低。 总的来说，二者各有利弊。最好做预实验时就试验一次，选择最佳的引物。 |
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