Western Blot基本概念

印迹技术

1975，Edwen Southern提出分子印迹概念。

概念：将存在于凝胶中的生物大分子转移（印迹）于固定化介质上并加以检测分析的技术。目前主要应用于DNA,RNA，蛋白质的检测。

蛋白质免疫印迹法

Western blotting: 免疫印迹法是检测蛋白质混合溶液中某种特定目的蛋白质的定性方法，也可以作为确定同一蛋白质在不同细胞或者同一种细胞不同条件下的相对含量的半定量方法。由于其检测往往需要抗体，所以也被称为免疫印迹技术。

应用

1 检测样品中特异蛋白存在与否

2 细胞中特异蛋白的半定量分析

3 蛋白质分子相互作用的研究

实验操作

1 细胞裂解物的准备；

2 细胞裂解物的蛋白定量；

3 细胞裂解物的SDS-PAGE；

4 蛋白质的转移；

6 目的蛋白质的检测。

免疫印迹只能检测目的蛋白的相对含量

测定相对含量时，需要内参照

选择合适的反应条件：SDS-PAGE胶浓度；转移膜的选择；转移时间的选择

注意电极的正负极

抗体反应时，注意驱除反应袋内气泡

操作要轻柔。