关于脱脂奶粉和BSA作为封闭剂的一些问题

生物实验中的封闭剂

Q：western blot 中脱脂奶粉封闭的是哪些蛋白?原理是什么?

A：脱脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原 的蛋白去封闭膜，避免标记抗体固定在膜上引起背景增高。

Q：请问封闭液和抗体稀释液用BSA 和脱脂奶粉有什么区别呢?

有人跟我说奶粉的封闭效果更好些，但是通常只能用于WesterBlot，如果要做ELISA或者phage display时候，蛋白铺板的话，不能使用脱脂奶粉。可是也有人说可以，请问是否有这个说法呢?

A：所谓封闭是用以减少或消除载体 上的非特异性结合蛋白的分子，一般是脱脂奶粉或BSA.对WesterBlot来说两者均为常用封闭剂。脱脂奶粉的成份远较BSA复杂，如果要做ELISA或者phage display时候，我们还是用BSA,有关的操作手册上也是如此。 我推测也没有依据说脱脂奶粉就绝对不能用，注意的是各种品牌的脱脂奶粉中残留的脂质量不同， 脂质是会影响实验结果的，即使是用于WesterBlot也要有所挑选， 有兴趣可以试试，但是不要在正式实验时试。

Q：请问大家，封闭的时候，为什么一定要用脱脂奶粉?

A：膜上有蛋白缺损点，不用蛋白封蛋白缺损点容易出现非特异染色。

也可用BSA 封，效果并不比脱脂奶粉好。