动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤

一、培养的贴壁动物细胞的蛋白质抽提步骤

1、从贴壁细胞培养瓶中小心倾去培养液。

2、预冷的PBS清洗贴壁的细胞2次，小心倾去PBS。

3、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂（1ml抽提试剂中加入5 μl蛋白酶抑制剂混合液，5 μl PMSF和5 μl磷酸酶混合液）。

4、细胞瓶中加入预冷的含抑制剂的蛋白质抽提试剂（107个细胞中加入1ml抽提试剂；5×106个细胞中加入0.5ml抽提试剂），轻轻摇动5分钟。

5、用一预冷的橡胶和塑料细胞刮将培养瓶壁上贴壁细胞刮下来，转移细胞悬浮液到离心管中，冰浴下摇动15分钟进行裂解。

6、裂解液于预冷的离心机中14，000xg离心15分钟。弃去沉淀，上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。

二、培养的悬浮动物细胞的蛋白质抽提步骤

1、2500xg离心10分钟沉淀悬浮的细胞，弃去上清液

2、预冷的PBS悬浮沉淀细胞，2500xg离心10分钟沉淀细胞，去上清。

3、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂（1ml抽提试剂中加入5 μl蛋白酶抑制剂混合液，5 μl PMSF和5 μl磷酸酶混合液）。

4、加入含抑制剂的预冷蛋白质抽提试剂（107个细胞中加入1ml抽提试剂；5×106个细胞中加入0.5ml抽提试剂）

5、轻轻摇动混和15分钟进行裂解。

6、裂解液于预冷的离心机中14，000xg离心15分钟。弃去沉淀，上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。

三、哺乳动物组织的蛋白质抽提步骤

1、组织称重，切小块放入管中。

2、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂（1ml抽提试剂中加入5 μl蛋白酶抑制剂混合液，5 μl PMSF和5ul磷酸酶混合液）。

3、加入预冷的含抑制剂的蛋白质抽提试剂（250mg组织中加入1ml抽提试剂）。

4、用匀浆器每次30秒低速匀浆，每次匀浆间隔冰浴1分钟，至组织完全裂解。

5、裂解液于预冷的离心机中14，000xg离心15分钟。上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。