蛋白透析中的沉淀问题分析和解决

蛋白透析时产生的絮状沉淀真的令不少人痛心不已，有时明明看了又看，都没发现哪里不对，那么，这其中可能是哪里出现问题，还有这些问题从哪些方面着手解决最合适呢?请看下文分析：

蛋白透析产生沉淀可能有以下原因：

1.由高浓度的蛋白变性试剂(如8m尿素)，到低浓度，再到不含变性剂的buffer，如果条件变化剧烈，使得蛋白不正确折叠而沉淀，这种情况比较常见。如果选择透析的方法，一定要多加几个中间浓度梯度，而且注意低温(4度)，这有利于蛋白正确折叠。

2.透析袋本身有一定的吸附，可以通过磁力搅拌来降低吸附。

3.透析液PH靠近等电点，像catzp说的，换buffer。

4.透析袋不干净?楼主不会范这种错误吧。或者没认真处理，有杂质、金属离子

建议：

1 可以采用梯度浓度透析，先采用与你纯化后蛋白盐浓度相近的透析液透析，4-8小时后换更小浓度的盐溶液透析，最后采用生理盐水或PBS (pH 7.4)透析。

例如：用6M盐酸胍沉淀的目的蛋白，第一步透析可采用4M盐酸胍透析，4-8小时后采用2M盐酸胍透析，再之后可以使用PBS 或生理盐水。

2 透析液的pH值不要和目的蛋白的等电点接近，这样目的蛋白可能会更容易沉淀。

3 保持蛋白浓度在mg/ml量级上面。

4 用20mM的醋酸透析也能降低沉淀

5 加一些保护剂，如蔗糖，甘油，巯基乙醇等。

6 减少脱盐时间。可考虑用超滤或者G系列的凝胶脱盐，这样时间较快，减少蛋白质的变性。

7 增加蛋白质浓度也可在一定程度上减少透析过程中蛋白质的沉淀，不过效果不是特别好的。

8 最后，不排除是蛋白不稳定的可能性，可在提纯开始时加点甘油，浓度控制在10-25%左右。