双向电泳溶液配制方法

A. 裂解液 (lysis solution)        (8M Urea, 4%CHAPS, 2% Pharmalyte3-10, 40 ml)

新鲜配制或者分装贮存于-20℃        ① 如果需要，尿素的浓度可以调高到 9或者 9.8M，也可用 7M Urea，2M Thoiurea。        ② 其他的去垢剂（如 Triton X-100，NP-40，还有其它的非离子去垢剂或者双性离子去垢剂）可以取代 CHAPS。        ③ 如果需要，蛋白质酶的抑制剂和或者还原剂可以加入。

B．水化液        （不含有 IPG buffer, Rehydration stock solution without IPG   buffer）        (8M Urea, 2% CHAPS, bromophenol blue,25ml)

分装贮存于-20℃        ① DTT和 IPG buffer在用之前加入：每 2.5ml 水化液加 7mg DTT。如果胶内上样，则样品液在用之前加入到 2.5ml的水化液中。        ② 如果需要，尿素的浓度可以调高到 9或者 9.8M。        ③ 其他的去垢剂（如 Triton X-100，NP-40，还有其它的非离子去垢剂23或者双性离子去垢剂）可以取代 CHAPS。

溴酚蓝储液

C. 水化液        （含有 IPG buffer，Rehydration stock solution with IPG buffer）        (8M Urea，2% CHAPS，0.5%  or 2% IPG buffer，bromophenol blue，25ml)

分装贮存于-20℃        ① DTT和 IPG buffer在用之前加入：每 2.5ml 水化液加 7mg DTT。如果胶内上样，则样品液在用之前加入到 2.5ml的水化液中。        ②IPG buffer 的浓度取决于所用的等电聚焦系统和 IPG胶条的 pH 范围。        ③ 如果需要，尿素的浓度可以调高到 9或者 9.8M。        ④ 其他的去垢剂（如 Triton X-100，NP-40，还有其它的非离子去垢剂或者双性离子去垢剂）可以取代 CHAPS。        ⑤ 浓度为 0.5%的 IPG buffer用 125μl IPG buffer，浓度为 2%则用 500μl。

D.平衡液（SDS equlibration buffer） (50mM Tris-cl pH8.8, 6M Urea, 30% glycerol, 2% SDS, bromophenol blue, 200ml)

分装 40ml 贮存于-20℃。这是一个贮存液。用之前在加 DTT或者碘乙酰胺。

E.单体贮存液（Monomer stock solution）        （30% acrylamide,0.8% N,N!-methylenebisacrylamide,200ml）

用 0.45微米的滤纸过滤。4℃避光保存。

F.4x分离胶溶液(4x Resolving gel buffer) (1.5M Tris-Cl pH8.8, 1000 ml)

用 0.45微米的滤纸过滤，4℃保存。

G.10% SDS溶液

用 0.45微米的滤纸过滤，室温保存。

H.10%过硫酸铵(10% Ammonium persulphate)

当加入水时，新鲜的过硫酸铵会发出“咔嚓”声音。如果没有声音，则需要换新的药品。用之前配制。