电泳和Western转印的常见问题
表1 Common problems for electrophoresis and western bloting问 题可能原因建议解决方法推荐电压条件下电泳
表1 Common problems for electrophoresis and western bloting| 问 题 | 可能原因 | 建议解决方法 | | 推荐电压条件下电泳时间过长。 | 电泳缓冲液过稀。 | 配制新鲜缓冲液，使用1X稀释液。 | | 推荐电压条件下电流过高，热量过大。 | 电泳缓冲液过稀。 | 配制新鲜缓冲液，使用1X稀释液。 | | 推荐电压条件下电流过低或无电流。 | 接触不良。 | 在电泳前移除胶盒底部的封条；确认缓冲液没过加样孔；检查buffer core上导线连接。 | | 蛋白带型条状（streak） | 上样过量。 样品中盐浓度过高。 | 降低蛋白上样量。通过透析或凝胶过滤降低样品中的盐浓度。 | | 样品沉淀。 | 加大样品中SDS的浓度。 |
| | 样品中的污染，如脂类或DNA 复合物。 | 离心或过滤样品以除去特定污染。 |
| | 制胶不佳。 | 确保灌胶均匀，一次完成。 |
| | 条带模糊。 | 蛋白样品部分变性。 | 完全变性蛋白。 | | 蛋白样品部分还原。 | 确保加入足够量的DTT或β巯基乙醇。 |
| | 电泳时间过长。 | 观察前面的指示剂染料，掌握恰当的电泳时间。 |
| | 哑铃形条带或"微笑"条带。 | 上样体积过大导致不完全堆积。 | 使用恰当的上样体积。如果样品过稀，使用超滤浓缩。 | | 电泳过程中电场不均匀。 | 如果蛋白浓度已知，上样时确保对称。 |
| | 分离胶表面不平。 | 在制胶时使分离胶表面水平。 |
| | 凝胶过期。 | 在指定的失效期前使用凝胶。 |
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