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生物化学

二氢硫辛酰胺脱氢酶的测定实验-硫辛酰胺的还原反应

2024-12-07 生物化学 加入收藏
材料与仪器酶样品磷酸钾 NAD+ NADH DTE EDTA DL-硫辛酰胺分光光度计步骤0.93 ml 实验混合物0.05 ml 0.2 mol/L DL-二

材料与仪器

酶样品
磷酸钾 NAD+ NADH DTE EDTA DL-硫辛酰胺
分光光度计

步骤

0.93 ml 实验混合物

4.png

0.05 ml 0.2 mol/L DL-二氢硫辛酰胺 10 mol/L

0.02 ml 酶样品

30 ℃ 时,于 340 nm 处吸收值发生变化,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。

常见问题

实验所需「试剂」具体见「其他」

0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.5

0.1 mol/L NAD+(游离酸,Mr=663.4;663 mg 溶于 10 ml 水中)

0.01 mol/L NADH(二钠盐,Mr=709.4,71 mg 溶于 10 ml 水中)

0.1 mol/L DTE(二硫赤藓糖醇,Mr=154.2;或二硫苏糖醇,DTT,Mr=154.2;154 mg 溶于 10 ml 水中)

0.1 mol/L EDTA(Mr=292.2;292 mg 溶于 10 ml 水中)

0.2 mol/L DL-硫辛酰胺(6,8-硫辛酰胺,Mr=205.3;51 mg 分别溶于 1.25 ml 乙醇或者丙酮中)

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