二氢硫辛酰胺脱氢酶的测定实验-二氢硫辛酰胺的氧化反应
原理此可逆反应可以从任一方向检测。氧化型硫辛酸和其氨基化合物是可以购买到的，但是利用简单的步骤就可使其还原。硫辛酸和其氨基化合物都可作为底物，有氨基存在，此酶的
原理
此可逆反应可以从任一方向检测。氧化型硫辛酸和其氨基化合物是可以购买到的，但是利用简单的步骤就可使其还原。硫辛酸和其氨基化合物都可作为底物，有氨基存在，此酶的活性要强 5 倍。
材料与仪器
酶样品磷酸钾 NAD DTE DL-二氢硫辛酰胺
分光光度计
步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
0.96 ml 实验混合物
0.02 ml 0.2 mol/L DL-二氢硫辛酰胺 4.0 mol/L
0.02 ml 酶样品
开始加入 0.01 ml 0.1 mmol/L H2O2 溶液
30℃ 时，于 340 nm 处吸收值发生变化，ε340＝6.3×103 l/（mol·cm）。
常见问题
试剂：
0.1 mol/L 磷酸钾，pH7.5
0.1 mol/L NAD（游离酸，Mr＝663.4；663 mg 溶于 10 ml 水中）
0.1 mol/L DTE（二硫赤藓糖醇，Mr＝154.2；或二硫苏糖醇，DTT，Mr＝154.2；154 mg 溶于 10 ml 水中）
0.2 mol/L DL-二氢硫辛酰胺（Mr＝207.3；52 mg 溶于 1.25 ml 乙醇或者丙酮。原料溶液浓度的二氢硫辛酰胺不可溶于水中，而且不可溶于酒精。存在醇脱氢酶时，例如天然的乙醇可以与 NAD 反应形成乙醛和 NADH，因此必须排除这个酶的活性，若两者选一，底物必须溶解于丙酮溶液中）。
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