SDS-PAGE胶染色
一、各种蛋白染色方法的灵敏度比较染色方法灵敏度与质谱的兼容性Silver1- 10ng-Silver (MS compatible)10ng+Comassie
一、各种蛋白染色方法的灵敏度比较
| 染色方法 | 灵敏度 | 与质谱的兼容性 |
|---|---|---|
| Silver | 1- 10ng | - |
| Silver (MS compatible) | 10ng | + |
| Comassie G -250 or R-250 | >30ng | + |
| Antibody(Western blot) | 1ng | - |
二、考马斯亮蓝染色
CBB 染色液：0.5%考马斯亮蓝 G250 或 R250；40%甲醇；10%乙酸；将 CBB 溶于甲醇中并不停的搅拌 15min。
加入乙酸与 ddH2O 脱色液：30%甲醇；10%乙酸
染色方法：1. 在摇床上染色 30min；2. 脱色至蛋白点或条带清晰可见；3. ddH2O 洗 3-5 次。
三、胶体考马氏亮蓝染色 ColloidalCoomassie Staining（Cambridgecentrefor porteomics）
sensitivity = ~100ng
1. 固定：甲醇/ 醋酸/H2O(45:1:54)至少 20min.
2. 染色 12-18hr。
染色液： 17% (w/v) 硫酸铵；34%甲醇；0.5%醋酸；0.1% (w/v) CoomassieG250。
3. 脱色：用 H2O 脱色至蛋白点和背景清晰.
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