组织的分离实验-机械分散法

Hanks
镊子 网筛 碟皿 吸管 注射器 培养瓶

步骤

一、切割分离法

在进行组织块培养时，可采用剪切法，一般多剪切成1 mm3大小的块。

具体操作如下：

1.  无菌切取1 cm3组织一块，置入青霉素瓶或小烧杯中，左手斜持容器，右手持眼科尖剪或弯剪（剪柄较长为好）伸入容器中，反复剪切组织至1 mm3大小为止（成糊状）。

2.  用吸管吸取Hanks液把附着在剪刀上的组织小块冲下，并再补加3~5 毫升Hanks液后，用吸管反复轻轻吸吹冲打片刻，低速离心、去上清、余下组织块即可用于培养。

3.  剪刀剪切法可能对组织有一定损伤，但操作比较方便。

亦可用手术刀反复切割法，把组织块放在凹窝玻璃中，两手各持尖手术刀一把，交错反复切害割至1 mm3为止。手术刀切割法对组织损伤较小，但在空气中暴露时间较长，污染机会大些。

以上两方法都适用于组织块培养法。
二、机械分散法

某些软组织如脑、胚胎以及一些肿瘤组织等，可采用机械法进行分散。

常用者有两种，一是把组织放入注射器针管中压挤法，二是把组织置于不锈钢纱网中用钝物压取法。

不论用那一种方法，都应把组织块先剪成小块后再处理。

其中以压取法较多用，其程序如下： 1.  清洗

取得组织后，先用BSS洗去表面血污，然后预切成5~10 mm3的小块，置入不锈钢网筛中（1 mm 孔径）；
2.  压挤

把网筛放在大碟皿上方，一手持网筛柄，另手用无菌度管末端径轻压挤组织，使之穿过纱网，然后用吸管吸取营养液把纱网上剩余组织吹洗掉；
3.  反复

用吸管从碟皿中吸出较大组织块，置入10 μm 筛中，进行再压挤，方法同2；
4.  镜检

被滤过的悬液即可用于培养；可先吸取不许悬液镜检，如组织块过大，可再用20 μm 筛做进一步压挤，以分散成单个细胞或细胞团；
5.  培养

计数细胞后，接种培养。

注意事项

1.  机械纱网压挤滤过法简便易行，节省时间，但对组织可能有一定损伤。

2.  纱网网眼愈小，所需压力越大，组织受损越重，故本法仅适用于处理软组织，对较硬组织和纤维性组织效果不好。