血糖测定实验-酶法

血糖中β－Ｄ葡萄糖在葡萄糖氧化酶催化下，氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶催化下，氧化氧的受体——邻联甲苯胺产生有色化合物。在有足够的葡萄糖氧化酶和过氧化物酶存在下，形成有色化合物的量和葡萄糖的量成正比，并在625 nm处有最大吸收。

材料与仪器

葡萄糖
邻联甲苯胺 醋酸 葡萄糖氧化酶 辣根过氧化酶
试管 试管架 吸量管 722S分光光度计

步骤

溶液配制：

1. 1％邻联甲苯胺溶液：1 g邻联甲苯胺溶于100 ml无水乙醇，于棕色瓶保存。
 
2．醋酸缓冲液（ｐH 5）：300 ml 0.15 mol/L醋酸（8.7 ml冰乙酸定容至1 L），700 ml 0.15 mol/L醋酸钠混合后调ｐH 至５（用氢氧化钠或盐酸）。
 
3．葡萄糖氧化酶，辣根过氧化酶：10 mg溶于10 ml水中，放于4 ℃保存。
 
4．含邻联甲苯胺试剂：150 mlpH5醋酸盐缓冲液，1 ml葡萄糖氧化酶溶液，1 ml过氧化物酶，1 ml 1％邻联甲苯胺溶液，混合后保存在4 ℃下，可存放7周。
 
5．标准葡萄糖溶液：100 mg干燥的葡萄糖溶于100 ml 0.3%安息香酸溶液（安息香酸0.3 ｇ溶于100 ml水），成1 mg/ml。

实验操作：

取三支试管，按如下顺序操作：

空白管蒸馏水                                      1 ml
标准管标准葡萄糖溶液                      1 ml
测定管待测样品(无蛋白血滤液)       1 ml

待测样品含糖控制在400～600 μg/ml。每隔半分钟依次向各管加入含邻联甲苯胺试剂5 ml，立即混合并准确反应10 min（夏季反应时间可缩短），在波长625 nm处，每隔半分钟分别读取光密度值，以空白作为比色时的对照。

按下列公式计算：