常用培养基配方(二)
1、苯丙氨酸培养基
成分: 酵母浸膏 3g DI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g) 2g 磷酸氢二钠 1g 氯化钠 5g 琼脂 12g 蒸馏水 1000ml
制法:加热溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min,使成斜面。
试验方法:自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在36±1℃培养4h或18~24h.滴加10%三氯化铁溶液2~3滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。
2、氨基酸脱羧酶试验培养基
成分: 蛋白胨 5g 酵母浸膏 3g 葡萄糖 1g 蒸馏水 1000ml 1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液 1ml L-氨基酸或DL-氨基酸 0.5或1g/100ml pH6.8
制法:除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100ml,分别加入各种氨基酸:赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸、L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入,再行校正pH至6.8,对照培养基不加氨基酸,分装于灭菌的小试管内,每管0.5ml,上面滴加一层液体石蜡,115℃高压灭菌10min。
试验方法:从琼脂斜面上挑取培养物接种,于36±1℃培养18~24h,观察结果.氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色,对照管应为黄色.。
3、蛋白胨水(靛基质试验用)
成分: 蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g 氯化钠 5g 蒸馏水 1000ml pH7.4
制法:按上述成分配制,分装小试管,121℃高压灭菌15min。 靛基质试剂 柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75ml戊醇中,然后缓慢加入浓盐酸25ml。 欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95ml95%乙醇内,然后缓慢加入浓盐酸20ml。
试验方法:挑取小量培养物接种,在36±1℃培养1~2d,必要时可培养4~5d,加入柯凡克试剂约0.5ml,轻摇试管,阳性者于试剂层成深红色;或加入欧-波试剂约0.5ml,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。
注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用。