弥散性血管内凝血-家兔急性 DIC 动物模型

弥散性血管内凝血，也称 DIC。目前，用于弥散性血管内凝血的教学方法主要有家兔急性 DIC 动物模型的方法。

原理

家兔急性 DIC 动物模型的方法的基本原理是耳缘静脉注入兔脑粉浸液，通过激活外源性凝血系统，导致 DIC 发生。

用途

家兔急性 DIC 动物模型法可用于探究急性 DIC 的发病机制。

材料与仪器

器材：

① 动物实验手术器械

② 试管架，试管

③ 刻度离心管，离心机

④ BL－420 生物机能实验系统

⑤ BI－2000 微循环图像分析系统

试剂：

① 3％ 戊巴比妥钠溶液

② 4％ 兔脑粉生理盐水浸液

③ 3.8％ 枸橼酸钠溶液

步骤

家兔急性 DIC 动物模型法的基本过程可分为如下几步：

（一）实验组

（1）家兔称重，仰卧位固定在兔台上。

（2）3％ 戊巴比妥钠溶液（1 mL/kg）经耳缘静脉注射行全身麻醉。

（3）剪去颈部手术视野的被毛，常规暴露气管，插气管插管，保持呼吸通畅；分离一侧颈总动脉，插入硅胶管，作取血样本用；分离另一侧颈总动脉，行颈总动脉插管并连于压力换能器，在 BL－420 生物机能实验系统上描记血压。

（4）在右侧腹直肌旁做长 5～8 cm 的纵向中腹部切口，钝性分离肌肉，打开腹腔后，推开大网膜，找出一段游离度较大的小肠肠袢，从腹腔中拉出，放置在 BI－2000 微循环图像分析系统连接的微循环恒温灌流槽内，使肠系膜均匀平铺在有机玻璃观察环上，压上固定板，调整灌流液液面，使其刚刚覆盖过肠系膜。

（5）用 BI－2000 微循环图像分析系统于显微镜下观察肠系膜的正常微循环。记录正常状态下的血压。经颈动脉取血，将最先流出的数滴血弃之，然后于盛有 3.8％ 枸橼酸钠溶液（0.5 mL）的离心管中放入兔血 4.5 mL，上下颠倒混匀，请勿震荡。先取 20 μL 供血小板计数用，其余血液离心 15 min（3 000 r/min），取血浆检测凝血相关指标。

（6）取 4％ 兔脑粉生理盐水浸液，按 2.0 mL/kg 计算，将总量用生理盐水稀释至 30 mL，由耳缘静脉注射（可用头皮静脉针），在 15 min 内注完。其注入速度为：第一个 5 min 以 1.0 mL/min 注入；第二个 5 min 以 2.0 mL/min 注入；最后 5 min 以 3.0 mL/min 注入。

（7）用 BI－2000 微循环图像分析系统于显微镜 10x 物镜下动态观察肠系膜的微循环；于 40x 物镜下观察微循环中血细胞及血小板形态、血流速度、血形成、血浆外渗现象等。

（8）分别于注射兔脑粉浸液开始后 15 min、45 min 记录血压变化，并由颈总动脉采集血样，检测血小板计数和凝血相关指标。

（9）实验结束后处死动物，打开胸腔、腹腔，观察各脏器的变化。

（二）对照组

将耳缘静脉注入兔脑粉浸液改为注入等量生理盐水，注入途径、总量、速率、观察指标等均与实验组相同。

注意事项

（1）本实验中，兔脑粉浸液的制备及注射速度对实验成败影响较大。

① 兔脑粉浸液的制备：称取兔脑粉 400 mg，其活力（PT）不得大于 12 s，加入生理盐水 10 mL，充分搅匀后放入 37 ℃ 恒温水浴内孵育 60 min，每隔 15 min 充分搅拌一次，然后离心（1000 r/min）5 min，取上清液过滤后，供静脉注射用。或将兔脑凝血活酶冻干制剂稀释后静脉注入。

② 注入兔脑粉浸液的原则是先慢后快，切忌过快，否则极易造成动物猝死。注射过程中密切观察动物呼吸情况，必要时酌情调整注射速度。

（2）每次采集完血样用生理盐水冲洗动脉插管（5 mL 注射器）以防管内凝血。注意不能使用抗凝剂，以免影响实验结果。

（3）本实验中所用试剂、血浆样本及吸管较多，同一吸管只能吸取某一试剂或血浆样本，避免交叉使用。

（4）如室温低于 20 ℃，实验用血浆应在 37 ℃ 恒温水浴中保温 1 min。