肺结核动物模型建模实验

结核病近年来又成为全球关注的公共卫生问题，据世界卫生组织统计，全球每年约有 200 万人死于结核病，800 万新发病例。据 2000 年流行病学抽样调查的结果显示，我国现有结核病患者 450 万，每年约有 18 万结核病患者死亡。因此，各个国家的专家学者开展了各项新型疫苗的基础研究。

建立肺结核动物模型（animal models of pulmonary tuberculosis）是进行结核病研究的基础，各种新型的疫苗也需要动物模型来做相关的评价。

原理

肺结核动物模型建模实验的基本原理是结核分枝杆菌在体内感染后通常会引起机体组织的渗出、坏死或增生 3 种病理变化，并根据机体的反应性（包括免疫反应和变态反应）、菌量、毒力及组织特性的不同，可出现不同类型的病理变化。

材料与仪器

器材：

① 注射剂；

② H37Rv 标准毒株；

③ C57BL/6 小鼠等。

试剂：

① 吐温 80 生理盐水。

步骤

肺结核动物模型建模实验的基本过程可分为如下几步：

A. 小鼠：选取 C57BL/6 小鼠，6～8 周龄，体重（18±2）g。将经过小鼠体内毒力复苏的 H37Rv 标准毒株，转种于改良罗氏培养基上，37 ℃ 保湿培养 20 天。

B. 刮取生长良好的干菌落研磨，加入 0.05％ 的吐温 80 生理盐水研磨成 1 mg/mL 的细菌悬液，每毫升悬液含 H37Rv 约 1x107 cfu 活菌。

C. 菌液接种于罗氏培养基上用度确定，培养 20 天后确定菌液浓度为 1x107 cfu/mL。取 0.2 mL 菌液经尾静脉注射小鼠。

D. 第 3 周时，可见感染程度不同的病理变化，大多数肺泡腔内充满以中性粒细胞为主的炎性渗出物和坏死组织，病灶中心可见明显干酪样坏死，部分可见肺水肿、肺气肿，病变累及约 2/3 左右肺组织。

E. 第 6 周时，可见到大、中、小结核结节及片状融合性病灶，有干酪样坏死及肺水肿，病变范围多在 2/3 以上。第 9 周时，尾静脉感染组多见片状融合性结核病灶及一定量肺泡巨噬细胞增生病变，范围达 3/4 左右。抗酸染色后，在镜下可见不同数量的结核分枝杆菌呈阳性。