肺气肿动物模型建模实验-酶诱导法构建肺气肿动物模型（肺气肿动物模型建模实验）

猪胰蛋白酶和木瓜蛋白酶是针对弹性纤维的蛋白水解酶，通过气管内滴入直接破坏肺泡间隔的弹性纤维，使肺泡腔持续扩张而形成肺气肿。现广泛用于各种动物肺气肿模型的复制，也是目前最常用的肺气肿动物模型。

但木瓜蛋白酶不是特异性作用于肺泡间隔的弹性纤维，还会同时造成气管壁和血管壁等组织的破坏，现主要用于蛋白酶用量较大的大动物如犬、马及绵羊等肺气肿模型的诱发，而且通常采用雾化吸入的方法使木瓜蛋白酶尽可能进入肺泡，直接作用于肺泡壁。

猪胰蛋白酶是特异性针对弹性纤维的蛋白水解酶，通过一次或多次气管内滴入直接破坏肺泡间隔的弹性纤维，使肺泡腔持续扩张而形成肺气肿，现广泛用于各种动物肺气肿模型的复制。

原理

酶诱导法构建肺气肿动物模型的基本原理是大量研究发现，肺组织中蛋白酶／抗蛋白酶系统失衡是其主要影响因素。肺组织中参与肺泡壁降解的蛋白酶主要是弹性蛋白酶。

许多研究证实，将弹性蛋白酶注入动物肺内可致肺气肿病变，其机制是弹性蛋白酶可分解肺内弹性蛋白、纤维粘连蛋白、胶原等，使肺的弹性回缩力减弱或丧失所致。

材料与仪器

器材：

① 外科动物实验台；

② 气管插管机；

③ 呼吸机；

④ 雾化器药瓶；

⑤ 犬等。

试剂：

① 木瓜蛋白酶；

② 阿托品；

③ 地西泮；

④ 氯胺酮；

⑤ 异戊巴比妥钠；

⑥ Penlon。

步骤

酶诱导法构建肺气肿动物模型的基本过程可分为如下几步：

犬：麻醉前 30 分钟肌内注射阿托品（0.3 mg/kg），地西泮 10 mg。氯胺酮（15 mg/kg）及异戊巴比妥钠（80 mg/kg）肌内注射麻醉，成功后固定于外科动物实验台。静脉给以肌松剂 Penlon（0.02 mg/kg），气管插管机控呼吸。

（1）气管内滴入法

A. 双侧肺气肿模型复制：将 4 g/L 木瓜蛋白酶 30 mL 分次经气管插管内注入，每次 10 mL，每 30 分钟给药 1 次，3 次/天。用药后调整呼吸机参数，潮气量 20～25 mL/kg，呼吸频率 14～16 次/分，呼气末正压通气（PEEP）12～16 cm H2O。持续正压通气 2 小时转为正常通气，动物清醒后拔管饲养。

单侧肺气肿模型复制：行双腔气管插管，需要侧注药，用药量减半。调整呼吸机参数、通气时间同前。6～7 天后重复给药、通气 1 次，共 2 次。

（2）雾化吸入法

A. 双侧肺气肿模型复制：将 6 g/L 木瓜蛋白酶 30 mL 加入雾化器药瓶，三通管连接雾化器排出管与呼吸机吸气管气管插管端，雾化率 2 mL/min。雾化结束后调整呼吸机参数、通气时间同上。

单侧肺气肿模型复制：行双腔气管插管，需要侧三通管与雾化器连接，药物浓度为 3 g/L。调整呼吸机参数、通气时间、重复给药时间及次数同前。