结直肠癌动物模型建模实验-结直肠癌肝转移动物模型

结直肠癌肝转移动物模型肿瘤既能在原位生长，又可出现肝转移，能更好地表达大肠癌的生物学特性，更能模拟人体肿瘤发生、发展过程。

原理

结直肠癌肝转移动物模型的基本原理是利用小鼠结肠腺癌细胞株在小鼠体内大肠种植生长，将癌细胞通过各种方法种植在结直肠上形成结直肠癌，并发生肝转移，从而建立结直肠癌肝转移动物模型。

用途

结直肠癌肝转移动物模型适用于结直肠癌晚期和远处肝转移的研究，以及晚期抗癌药物治疗等相关药理学方面的研究。

材料与仪器

器材：

① 手术工具

② BALB/e 鼠结肠腺癌细胞株（CT26）等

试剂：

① RPMI 1640 营养液（10% 胎牛血清）

② 巴比妥钠

步骤

结直肠癌肝转移动物模型的基本过程可分为如下几步：

细胞株：BALB/e 鼠结肠腺癌细胞株（CT26）。常规培养 CT26 细胞于含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 营养液。取指数生长期的细胞，消化吹打成单细胞悬液，952 g（1000 r/min）离心 5 分钟，弃上清液，加适量不含血清的 RPMI 1640 营养液调整细胞浓度至 1x106 个/mL。

（一）脾内种植法

A、对裸鼠进行腹腔内注射麻醉，使用 1% 戊巴比妥钠 45 mg/kg，麻醉后固定于自制小鼠固定器，手术野常规皮肤消毒，左背部斜切口 0.5～1.0 cm，进腹腔暴露脾脏后，用小纱布包裹将脾下极轻柔地提出腹腔，用 5 号针头将结肠癌细胞缓慢注入裸鼠脾脏，每只裸鼠注射细胞悬液 0.2 mL，注射持续时间约 3 分钟，可见脾被膜肿胀、变白，注射完毕拔针后以 75% 乙醇棉棒压迫针眼 2 分钟，以压迫止血和杀灭可能外渗的癌细胞，防止腹腔内种植转移。

B、将脾脏放回原位，关腹。麻醉清醒后常规饲养，饲养两周后可处死小鼠，取肿瘤标本。

（二）直肠种植法

A、将小鼠麻醉后固定于自制小鼠固定器，消毒后充分暴露肛门，于小鼠肛门的两侧壁和后壁进针，缓慢注入细胞悬液（1x106/mL）

B、常规饲养两周后形成肿瘤，可处死小鼠，取肿瘤标本。

（三）腹腔注射法

A、将 CT26 细胞悬液（1x106/mL）0.2 mL 缓慢注入 BALB/e 鼠下腹部正中偏右

B、饲养两周后可处死取肿瘤标本。