新型支气管肺发育不良动物模型的建立

目前大多研究选用高浓度氧暴露 (≥90%)，但由于高浓度氧暴露所引起的为急性肺损伤，而中浓度长时间高氧暴露 (≤60%) 所引起的损伤为慢性肺损伤，其病理特征与新型 BPD 更接近。

材料与仪器

动物模型：

新生鼠。

试剂：

①4% 多聚甲醛；

②酒精；

③生理盐水；

④10% 水合氧醛；

⑤乙醇；

⑥石蜡。

步骤

新型支气管时没育不良动物模型的造模方法如下：

（一）BPD 动物模型的建立：

A、将高氧各组新生鼠 10-12 只每窝连同代母鼠一起置入温度为 25- 26 ℃，湿度 60% -65% 的自制氧箱内。

B、测氧仪控制氧浓度维持在 60%，箱内放钙石灰吸收 CO2，防止箱内 CO2 浓度过高。

C、空气组置于同一室内空气中，饲养条件同高氧组。

D、每天开箱 1 小时、新生鼠称重，将氧箱中的母鼠与空气对照组互换防止母鼠氧中毒，并更换饲料、水和垫料，密切观察各组大鼠的存活情况活动度、呼吸频率、唇色等。

E、通氧 4 天、14 天后进行检查，出现氧依赖，肺组织表现肺泡结构紊乱。肺泡增大，间隔增厚 (4 天) 或肺泡腔扩大、结构简化、间隔增厚、肺泡数量减少 (14 天) 判为合格 BPD 模型。

（二）肺组织大体形态改变：

A、通氧 4 天、14 天后分别从各组随机抽取 10 只大鼠，腹腔注射 10% 水合氧醛 (0.3 mL/g) 麻醉。

B、剖开胸腔，气管插管保持肺充气状态，观察肺组织色泽变化、体积大小，是否有出血、坏死及水肿发生。

（三）肺组织镜下形态学改变：

A、剖开大鼠胸腔，生理盐水灌注全肺后，从左支气管注入预冷的 4% 多聚甲醛至肺膨胀至肺尖。

B、取左肺放入多聚甲醛固定液中固定 24 小时后，梯度乙醇脱水，石蜡包埋，制作石蜡切片 (厚度 4 μm)，每例标本取连续的石蜡切片 3 张。

C、苏木素-伊红 (HE) 染色，光镜下观察各组鼠的肺组织病理学改变。

D、每张切片随机取不重叠的 5 个视野 (×200)，以 15 个视野的相应指标均值作为该例标本的 RAC 测定值。