脐带内皮细胞的分离

⑴脐带收集：用无菌止血钳夹闭脐带两端，在止血钳外侧剪断脐带，放入盛有4℃Cord Buffer的饭盒内。脐带在4℃放置不应超过24小时。 ⑵ 脐带内皮细胞分离 　　带无菌手套，取出脐带，在止血钳内侧用碘酒和酒精棉球消毒后，用无菌剪刀将两端脐带剪除。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓ 在脐带一端找到静脉，插入脐带静脉插管，用2根粗丝线扎牢，用Cord Buffer抽吸有的30ml注射器冲洗静脉腔，至将脐血洗净。 　　　　　　 　　　　　　 　　　　　↓ 　　 赶出静脉腔内残余液体，将脐带另一端用止血钳夹闭，用10ml注射器连接针头，注入37℃预热的0.1％胶原酶约6-8ml，放入37℃Cord Buffer中保温6-10min 　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓ 　　吸出静脉腔内胶原酶所消化的细胞悬液，加入预加有20mlcordBuffer的离心管中，冲洗静脉腔，一并加入离心管中。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓ 离心，1500rpm,10min弃上清，用5～7ml 20％FCS，RPMT 1640重悬细胞，转入培养瓶，放5％CO2 孵箱