HE 染色实验

包埋后的组织经过普通玻片切片后即可进行 HE 染色以达到形态学的观察需求，如果需要免疫组化或荧光分析，则切片时需要使用粘片剂处理玻片，防止多个操作步骤中的掉片。HE 染色是最传统的通过细胞核和胞质的嗜酸、碱性特点不同而分别将其染成天蓝及玫红色的鲜艳色泽以观察组织形态的染色方法。

原理

HE 染色实验的基本原理通过细胞核和胞质的嗜酸、碱性特点不同而分别将其染成天蓝及玫红色的鲜艳色泽以观察组织形态。

材料与仪器

器材：染缸、盖玻片、组织切片

试剂：

① 二甲苯

② 乙醇

③ 苏木素染液

④ 蒸馏水

⑤ 中性树胶

步骤

HE 染色实验的基本过程可分为如下几步：

A. 已烘干的切片在二甲苯中脱蜡 5～10 分钟，两次。

B 移入二甲苯和纯乙醇（1：1）混合液中 5 分钟左右（如经二次二甲苯脱蜡，此步可省略）。

C. 移入 100％、95％、85％、70％ 乙醇中，各级为 2～5 分钟。最后经蒸馏水转入染色液。

D. 自己配制或商业化购买的苏木素染液染色 5～15 分钟。

E. 流水冲洗 15～30 分钟，或者在 0.75％ 氯化铵溶液中短时间碱化或蓝化，使细胞核呈蓝色。

F. 蒸馏水短洗。

G. 依次经 70％、85％、95％ 乙醇脱水，各级为 2～3 分钟。

H. 0.1％～0.5％ 伊红染液染色 1～5 分钟，若着色困难，可在每 100 ml 染液中加入 1～2 滴冰醋酸，使易着色且不易脱色。

I. 依次快速通过 95％ 和 100％ 乙醇洗去多余的伊红染液，在浓度 95％ 以下的乙醇中伊红易脱色，应适当缩短时间。

J. 二甲苯透明（二次），共约 10 分钟。

K. 封片 擦去切片周围多余二甲苯，切勿干涸，迅速滴加适量中性树胶，再加盖玻片封固，避免产生气泡。在通风橱中吹干二甲苯，封片稳定后转移到片盒中保存。染色示意图见图 8-2-4。

注意事项

如果需要免疫组化或荧光分析，则切片时需要使用粘片剂处理玻片，防止多个操作步骤中的掉片