肠道免疫评价实验-ELISA法评价肠道免疫功能

ELISA 法评价肠道免疫功能是通过检测不同炎症蛋白如急性期炎症蛋白 MPO，血清淀粉样蛋白 SAA 或细胞因子如 IL-6，IL-1b 等的表达水平。

原理

ELISA 法评价肠道免疫功能基本原理是通过检测不同炎症蛋白如急性期炎症蛋白 MPO，血清淀粉样蛋白 SAA 或细胞因子如 IL-6，IL-1b 等的表达水平。

材料与仪器

器材：

组织匀浆器、酶标板、酶标仪。

试剂：

① 组织裂解液（200 mmol/L NaCl，5 mmol/L EDTA，10 mmol/L Tris，10% glycine，1 mmol/L PMSF，1 mg/ml Leupeptide，28 mg/ml aprotinin；pH7.4）;

② PBS 缓冲液;

③ BCA 蛋白浓度检测试剂。

④ ELISA 试剂盒

步骤

ELISA 法评价肠道免疫功能的基本过程可分为如下几步，以检测急性期炎症蛋白 MPO 为例：

A 取出目的肠道组织，在冰冷的 PBS 中纵向剪开，小心洗去腔内的消化液，在平板纸上吸去多余液体。

B 10 ml 圆底离心管中加入 1～2 ml 组织裂解液和漂洗后的肠组织，在冰浴状态下匀浆 30 秒。

C 冰上孵育 10 分钟，全部转移 1.5 ml EP 管中，4 ℃ 离心 15 分钟，转速 12000 r/min。

D 小心分离上清，使用 BCA 法测定蛋白浓度。

E 测定浓度后的上清分装后 - 80℃ 保存或冰上等待，立刻用于 ELISA 检测。

F 根据 ELISA 试剂盒配备的标准实验步骤进行 MPO 的水平检测。结果示例如图 8-3-6 所示。