全血细胞培养染色体技术常用试剂配制

一、国内实验室应用试剂配制 （一）培养液 （1）RPMI1640培养液：称取RPMI培养基9.8g，碳酸氢钠1.9g、青霉素100u/ml，加双蒸水至1000ml，调节 pH7.2～7.4无菌过滤冻存备用。 （2）小牛血清商品：成都生物制品厂。 （3）植物凝集素（PHA）：自制或成品（重庆药检所）。 （4）pH调整液：5% NaHCO3溶液高压灭菌（8磅15min），0.1N稀盐酸液100ml。 （5）秋水仙素：10mg/ml无菌过滤高压灭菌（8磅10min）。 （6）磷酸缓冲液：pH7.4。 磷酸氢二钠28.8g(H2O)、磷酸二氢钾2.67g(无水)，溶于1000ml双蒸水中，加肝素，终浓度为100u/ml。 （7）Giemsa染色液： Giemsa粉剂　　　　　　　　　　　1g 甘油　　　　　　　　　　　　　　66ml 在研钵中，加入少量甘油油仔细研磨然后放甘油全部加磨，60℃温箱中保温2h，冷却后加入甲醇66ml。装入有色瓶中混合待用。染色时用pH7.4磷酸缓冲液稀释10倍，随配随用。 （二）固定液 （1）甲酸：冰乙酸3：1混合即用。 （2）PBS缓冲液配制： NaCl　　 16g　　 Na2HPO4(12H2O) 　　5.65g KCl　　　0.4g 　KH2PO4　　　　　　　　0.4g 加双蒸水至1000ml pH7.0。 取5%胰酶（生理盐水配制）1ml加入50ml PBS液中（最终浓度为0.025%），4℃冰箱待用。 二、细胞培养（Bhatl B和McGee JOD,1990） 1．完全培养基 RPMI　　　　　　　　　　　　 76.0ml 胎牛血清 　　　　　　　　　　20.0ml 植物凝集素　　　　　　　　　 2.0ml 抗生素/抗菌素溶液（100