基于易错 PCR 产生随机突变体

易错 PCR (error-prone PCR ) 是产生随机突变体的另一常用方法，通过改变传统 PCR 反应体系中的 Mg2+ 浓度、dNTP 的浓度比例、pH，或使用低保真度的 Taq DNA 聚合酶，在 DNA 序列扩增中随机引入错误碱基，建立含突变序列的文库。是目前最常用的随机突变方法。

原理

易错 PCR 法的基本原理是通常采用缺乏 3'→5 ' 外切核酸酶活性的低保真 DNA 聚合酶扩增基因，从而产生较高的复制错误率（0.8x10-4～1.1x10-4 碱基替换／碱基对）。此外，改变 PCR 反应条件也可以增加错误率，常见的措施有：

①提高反应体系中的 Mn2+ 浓度，使得碱基配对的特异性降低；

②调整各种 dNTP 的比例，使碱基错误掺入率增加；

③提高反应体系中的 Mg2+ 浓度，使非互补配对碱基的稳定性增加；

④提高反应体系中的 DNA 聚合酶浓度，使错误合成的 DNA 链末端得以延伸。

易错 PCR 产物（含各种随机突变序列）随后克隆至适当的载体以构建突变文库。值得注意的是，如果克隆的效率不高，突变文库的规模会受到一定限制。