DNA实验

乙醇沉淀法（沉淀 DNA 的实验）

2024-05-22 DNA实验加入收藏

原理DNA 溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时,乙醇会夺DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合

原理

DNA 溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时,乙醇会夺DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代懈水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙醇,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA.一般在室温下放置15-30分钟即可。

材料与仪器

DNA
乙酸钠乙醇
EP管低温离心机移液器 -70度冰箱

步骤

1. 酶切前确定待切样品的浓度, 并选择合适的限制性内切酶和配套Buffer。

2. 在离心管中加入如下成分：

10xBuffer　 1ul

待切样品　　　xul

酶　　　　　　0.5-1ul

______________________

加水补足10ul

3. 混匀样品并短暂离心使样品沉于管底。

4. 将离心管置于37℃中温育1-3hr，若待切样品为PCR 产物，则可将反应时间适当延长。