DNA测序结果判读及常见问题分析

测序结果的判读

测序结果为.abi格式，可用软件chrosmas打开

一种颜色的峰代表一个碱基，峰的高低表信号的强弱。一个正常的N表示机器没法判读是哪种碱基，原因是：杂峰的信号高于机器默认的值，机器会认为该处有两个峰，因此不能判断确定是哪个峰，需要人工判读。以下三种情况会出现N：有杂合子，有杂峰，反应已结束。

原因：测序产物纯化不够

注意：染料峰位于序列的前 100 碱基以内;酒精峰位于序列的 220 ~ 320 碱基之间

产生的原因是样品或毛细管内有灰尘等固体小颗粒

原因：测序反应失败。

解决办法：改进条件，重做反应。注意两个关键因素：引物与模板之间的比例： 3.2 pmol: 200 ng 。模板 DNA 的纯度和用量： 1.6 ~ 2.0

原因：残余的 Dye 太多，纯化不够。有测序反应，但效率低下信号太弱

解决办法：纯化充分。避开引物峰，确定新的分析起点