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DNA实验

DNA电泳带型分析

2024-09-26 DNA实验 加入收藏
DNA电泳需要进行带型分析,在实验过程中常会发现所得的带型出现在这样那样的问题。在此,对DNA带型做了相应的分析。带型原因分析解决办法弱带或无带上样的DNA量不

DNA电泳需要进行带型分析,在实验过程中常会发现所得的带型出现在这样那样的问题。在此,对DNA带型做了相应的分析。带型原因分析解决办法弱带或无带上样的DNA量不够增加DNA的上样量,聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高DNA降解避免DNA。

带型原因分析解决办法
弱带或无带上样的DNA量不够增加DNA的上样量,聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高
DNA降解避免DNA的核酸酶污染
电泳时间过长,DNA跑出减短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度
EB染色的DNA,紫外光源不合适应用短波长(254 nm),增强紫外灯灵敏度
DNA带缺失小DNA带走出凝胶减短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度
分子大小相近的DNA带不易分辨增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度
DNA 变性电泳前请勿高温加热DNA链,以20 mM NaCl Buffer稀释DNA
巨大DNA链,凝胶电泳不合适在脉冲凝胶电泳上分析
DNA带模糊DNA降解避免核酸酶污染
DNA上样量过多减少凝胶中DNA上样量
所用电泳条件不合适电泳时电压不应超过20 V/cm,温度<30℃,巨大DNA链,温度应<15℃,核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力
DNA样含盐过高电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐
有蛋白污染电泳前酚抽提去除蛋白
DNA变性电泳前勿加热,用20 mM NaCl缓冲液稀释DNA
不规则DNA带迁移对于λ/Hind III片段COS位点复性电泳前加热DNA 65℃加热5-10分钟,然后在冰上冷却5分钟
电泳条件不合适电泳电压不超过20 V/cm,温度<30℃,电泳缓冲液有足够的缓冲能力
DNA变性以20 mM NaCl Buffer稀释DNA,电泳


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