细胞培养的核心之一是无菌操作,那么，菌从何而来?从人、物品以及环境中来。使用一次性、已灭菌的实验工具，能有效降低污染引入的风险，但总有一些工具、总有一些环节是需要反复使用的。而这就需要进行清洁和灭菌。
Part1
选择灭菌方法的基本原则 :
常见的2种操作是高压灭菌和过滤除菌,主要讲一下这两者的区别和注意事项.
灭菌方法的选择主要基于物品在高温下的稳定性,可抗高温的物品例如玻璃、金属、耐热塑料(PTFE)可采用干热灭菌;
热稳定的液体可以采用湿热灭菌,也就是高压蒸气灭菌;热敏感的塑材可以用乙醇或射线灭菌;热不稳定的液体可以采用过滤除菌。
Part2
高压灭菌
常见的高压灭菌方法是，使用灭菌锅加热水提高温度和压力来完成，其实验条件是将实验工具所处的环境加热至121°并维持至少20分钟。
由于水蒸气会渗透至整个空间，灭菌结束后需要有一个干燥的过程，高压蒸汽灭菌适用于热稳定的液体，例如水、盐溶液、或一些成份对热稳定的培养基；例如LB，同时，这种方法也适用于耐热的塑料，不少离心管、移液器、吸头、吸头盒。都是可以通过高压来灭菌的。
使用高压灭菌需要注意2点:1 将含有液体的玻璃器皿进行灭菌，如果其使用塑料盖密封，应在灭菌前拧松盖子，以防灭菌过程发生爆炸;2 如果实验工具需要后续用于无菌操作实验，建议灭菌锅所用的水使用无菌的超纯水，因为灭菌过后，锅内有可能存在凝结水，而后者可能会存在污染带入的风险。
Part3过滤除菌
对于不耐热的液体，可以使用孔径为0.1-0.2um的微孔过滤器除菌，过滤的方法分为正压过滤和负压过滤，区别在于正压过滤大多通过外力推压针筒，使目标液体通过滤器的滤膜后，杂质或污染物留在膜上，液体过滤至新的容器内。负压过滤是通过将容器外接一个泵，利用泵把容器内的空气抽走，实现一个负压的状态，而液体则从容器上方往下透过滤膜流入容器内。
使用过滤除菌，同样有几点要注意 :从操作上看使用负压过滤会简单不少，但由于泵在抽走空气的同时，也会带走容器内的二氧化碳，因此过滤后的溶液所处的环境的pH会提高。如果是一些对后续实验有pH要求的液体，应该视情况补充二氧化碳进容器内。但不管是正压还是负压，都需要对滤器进行质控检测，确保滤膜的完整性。这个质控操作有一个专有名词这个质控操作有一个专有名词。具体操作是; 当正压过滤完成后，所有液体已通过滤器时，提高压力直至滤器流出物中形成气泡，这就叫起泡点(bubble point)。它会在压力是过滤压力的两倍多时出现，过滤压力的数值可以参考产品说明书。如果滤器在灭菌压力(100kPa)，或更低压力时出现起泡，那么代表该滤膜已经穿孔。在这种情况下，任何已经收集的滤出液都应该被认为是未灭菌的，需要重新过滤。同时应更换滤膜。有一些化学溶液会溶解滤膜，因此，如果要使用过滤除菌的话，应该要提前检查滤膜材质是否能兼容这种化学溶液，例如DMSO，不能使用PES材质的滤膜进行过滤。
