定点诱变实验(利用PCR引物点突变)
材料与仪器DNADNA聚合酶 klenow 限制性内切酶水浴锅 离心机 培养箱步骤1. 制备模板(见基本方案,步骤1和2) 2. 合成和纯化寡核苷酸引物并对
材料与仪器
DNA
DNA聚合酶 klenow 限制性内切酶
水浴锅 离心机 培养箱
DNA聚合酶 klenow 限制性内切酶
水浴锅 离心机 培养箱
步骤
1. 制备模板(见基本方案,步骤1和2)
2. 合成和纯化寡核苷酸引物并对5‘端磷酸化。
3. 扩增模板DNA(基本方案,步骤4和5),在最后一次延伸结束后,加5 U 的klenow酶,30℃保温15 min。
4. 分析并处理反应产物(基本方案1,步骤6和7)。
5. 取所得扩增片段的一半量用侧翼序列内的限制性内切酶切割,低熔点琼脂糖凝胶电泳 纯化酶切片段。
6. 将两个扩增的片段通过平末端连接亚克隆入合适的载体。
7. 按基本方案1,步骤10、11进行。
7. 按基本方案1,步骤10、11进行。
常见问题
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