聚乙烯吡咯酮包被的硅胶混悬液分离法分离外周血单个核细胞

聚乙烯吡咯酮包被的硅胶混悬液分离法 分离外周血单个核细胞   【试剂及配制】 （1） 1.5mol/L 10×PBS：称取10g NaCl，2.5g KCl，14.4g Na2 HPO4 ，2.5g KH2 PO4 ，   先用少量蒸馏水溶解上述各物，再用蒸馏水定溶至1000ml。                   （1）         1×PBS：将上述10×PBS用蒸馏水稀释10倍即成。 （2）         比重为1.077 Percoll悬液   【操作方法】 （1）     取比重1.077的Percoll 3ml,放入15×15mm试管中； （2）     用PBS将肝素抗凝血稀释1～2倍后，将稀释全血加到Percoll 液上，稀释的血液：Percoll液约为2：1； （3）     用水平离心机以1500r/min离心10min，离心后单个核细胞位于血浆和Percoll 液的界面层，红细胞和粒细胞沉淀在Percoll层下，一部分单核细胞和血小板位于Percoll层上； （4）     吸取界面单个核细胞层，用PBS洗三次； （5）     用适当的培养液重悬单核核细胞，配成所需浓度备用； （6）     用台盼蓝拒染法检查细胞活力。