免疫荧光组织化学对照实验

免疫荧光组织化学对照实验     为保证免疫荧光组织化学染色的特异性，排除非特异性染色，必须在初次实验时进行对照实验。     (1)直接法需设的对照实验     1)标本自发荧光对照：标本只加PBS或不加PBS，甘油缓冲液封片，荧光显微镜观察应呈阴性荧光，即未见与特异性荧光相似的荧光。     2)抑制实验：可分为二步法和一步法。二步抑制法即在标本上先加未标记的特异性抗体，再滴加标记荧光抗体，结果应呈阴性或明显减弱的荧光。一步抑制法是先将荧光抗体与未标记抗体作适量(未标记抗体多于标记抗体)混合，再滴加在标本上染色，结果应为阴性。一步法较二步法简便而且稳定。为证实此种染色的抑制是由于较多的未标记抗体竞争抑制所致，而不是由于荧光抗体被稀释所致，可用盐水代替未标记抗血清，染色结果应为阳性。     3)阳性对照：用已知阳性标本作直接法免疫荧光染色，结果应呈阳性荧光。     如标本自发荧光对照实验和抑制实验均无荧光或弱荧光，而阳性对照实验和待检测标本均呈强荧光，即为特异性阳性荧光。     (2)间接法需设的对照实验：除与直接法一样设置自发荧光对照、抑制实验和阳性对照实验外，还需设荧光抗体对照实验，即标本只加荧光标记抗体，结果应为阴性。如自发荧光对照、荧光标记抗体对照和抑制实验均阴性，阳性对照和待检测标本均呈强荧光，即为特异性阳性荧光。