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如何做好western-blot实验
1.样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白
2025-01-07 89 -
蛋白质凝胶电泳注意事项
大多数蛋白质凝胶电泳是还原性条件下的十二烧基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS- PAGE) 。＊样品准备还原试剂2－巯基乙醇或者二硫苏糖醇加在变性胶的样品缓冲液
2025-01-07 78 -
碱变性法提取质粒DNA
质粒DNA提取的方法很多，有碱变性法、羟基磷灰石柱层析法、溴化乙锭 – 氯化铯梯度超离心法等。本次实验是一种小量快速提取法。小量快速提取法也有多种，但基本原理和
2025-01-07 79 -
DNA 凝胶电泳注意事项
DNA胶用来分离、确定或者纯化DNA片段。用于DNA测序反应的测序胶不在这儿讨论。每位实验室成员有不同的制胶方法。样品准备6 X 上样缓冲液： 30% (V/V
2025-01-07 79 -
抗体标记的步骤
下列步骤描述了使用Cy3作为代表性标记试剂， 用荧光succinimidy l 活性酶标记羊抗体。其他水溶性荧光标记物的使用与此类似(Mujumdar et a
2025-01-07 99 -
去除去污剂的可行性
离子型去污剂用分子筛G25 柱子进行凝胶过滤，对于一些蛋白质来说，用低于临界微团浓度的另一种去污剂来平衡柱子。加入8 mol/L 的尿素， 然后把去污剂加到离子
2025-01-07 74 -
PCR-SSCP实验步骤
一．样品制备1．PCR扩增并检测。根据不同的引物挑选适合的退火温度进行PCR扩增。扩增产物用2-2.5%的琼脂糖胶跑水平电泳检测，上样量3-5ul。PCR产物为
2025-01-07 101 -
无菌操作的注意事项及常见问题
做不同的实验，操作上会有小小的不同，而且不可能每个动作都被描述，所以实验时必须注意自己的动作。通常要注意的就是每项操作时都要尽可能减少污染的可能性，所以动作要尽
2025-01-07 115 -
cDNA文库构建详细步骤
cDNA文库的构建分为六个阶段：阶段1：反转录酶催化合成cDNA第一链1．在置于冰上的无菌微量离心管内混合下列试剂进行cDNA第一链的合成：poly(A)+RN
2025-01-07 106 -
SDS-PAGE的主要应用有哪些？
SDS-PAGE原理蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液
2025-01-07 99 -
western-blot实验过程中常见问题及解答
常见问题解决对策 两块玻璃板之间灌胶，胶总是不平玻璃没有洗干净，应该洗得很干净过硫酸铵和TEMED加量相对较多加完试剂后应摇匀 总是漏胶避免
2025-01-07 60 -
重叠延伸PCR实验
重叠延伸PCR实验重叠延伸PCR技术（gene splicing by overlap extension PCR，简称SOEPCR）由于采用具有互补末端的引物
2025-01-07 107 -
普通PCR的基本原理和注意事项
1、概述聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊D
2025-01-07 104 -
western-blot化学发光为什么会出现高背景？
做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现，要弄清楚“背景太高”的原因，先要知道“背景”是什么，“背景”也是发光，影响发光的因素就会
2025-01-07 75 -
异丙醇法沉淀DNA
DNA 在含有异丙醇的溶液中比在含有乙醇的溶液中难溶。乙醇沉淀法需要2 ~ 3 倍体积的乙醇，异丙醇沉淀则需要0.6 ~ 0.7 倍的体积。沉淀大体积溶液中的D
2025-01-07 111
