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荧光定量PCR技术及临床应用
1985年美国PE-cetus公司的人类遗传研究室mullis等人发明了具有划时代意义的PCR技术,从而使人们梦寐以求的体外扩增核酸片段的愿望成为现实。 198
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体外扩增DNA的直接序列分析
PCR技术代替了为测序而反复进行的分子克隆和模板制备步骤。PCR技术与自动测 序技术相结合后,它将成为一种最快、最有效的测定核苷权序列的方法。本章主要综 述各种
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推荐:PCR产物的直接测序
凝胶纯化PCR扩增的靶序列如果最佳PCR反应条件不能产生所需的特异性产物,可采用新的寡核苷酸重新进 行扩增,或用凝胶电泳来分离不同的PCR产物,而后再各自重新扩
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荧光定量PCR试剂的工作原理
用于荧光定量PCR仪的化学染料有多种,包括SYBR Green I、分子 Beacons、水解探针(TaqMan 探针)、ScorpionsTM 探针和Ampl
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CaCl2法大肠杆菌的感受态细胞的制备
一、实验目的与意义 学习使用CaCl2法制作大肠杆菌感受态细胞,使学生掌握感受态细胞制作的基本原理和操作技术。 二、实验原理 在自然条件下,很多质粒都可通过细菌
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实时定量RT-PCR检测急性白血病患者中WT1表达
WT1(Wilms’ tumor gene,WT1)定位于11p13,是最早发现与Wilms’肿瘤发生、发展有关的基因。 WT1主要在胚胎发生过程中表达,对泌尿
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PCR产物的直接纯化
一.原理 PCR产物一般都含有过量的引物、Taq DNA酶及dNTP,这些成分的存在将直接影响到后续的酶切、双脱氧PCR测序反应等过程,因此有必要除去。目前核酸
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PCR技术:PCR的污染与对策
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是易污 染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生.一、污染原因(一)标本间交叉污染:标本污染
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定量PCR Taqman探针试剂之选
不过科研人员就没那么好运了,科研中需要用到定量PCR检测的目标广泛,不容易找到带有探针的定量检测试剂盒。当然,针对这种现状,几个大公司陆续推出探针库,比如罗氏的
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Multiplex PCR: Critical Parameters and Step-by-Step Protocol
O. Henegariu, N.A. Heerema,S.R. Dlouhy, G.H. Vance and P.H. Vogt1 Indiana Univer
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PCR扩增过程中常见的问题及解决方法
PCR技术具有高度的特异性、选择性、灵敏性,而且快速、简便、易于自动化,因此在临床医学工作中受到广泛的重视及合理的应用。目前在我国许多基层医疗单位均已相继开展P
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PCR常见问题及解决方案
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模
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PCR技术:PCR用于进化分析
进化遗传学具有两个并列的研究方向:系统发育的重建和种群分析。自1962年, Zuckerkandl和Pauling提出蛋白质序列和基因序列的比较可以象分子种一样
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实时荧光定量PCR可快速诊断结核病
荧光 定量PCR 检测TB-DNA具有以下特征:1、高灵敏度,检测限度可达到10个菌/ml。根据临床资料显示,荧光定量PCR与浓缩集菌、培养法相比,对结核病检
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半定量RT-PCR (Semi-Quantitative RT-PCR )
Solutions10X RT Buffer10X PCR Buffer100 mM Tris pH 9.0500 mM KCl1% Triton X-1002