养大鼠平滑肌细胞的一点心得

我养了快半年的大鼠气道平滑肌细胞，有一点体会，特发上来和各位战友交流一下，互相进步。 壹．  器械 显微器械：眼科剪一把，直弯眼科镊各一把，细结镊一把，手术刀一把，针头诺干 杀老鼠器械：手术剪一把，大镊子一把，弯眼科镊一把，组织钳一把，50ml烧杯一个（锡纸包好） 另外：10ml离心管两个，培养皿两个，10ml的瓶子三个，小滤器两个，硅胶板一块，培养瓶盖子诺干 贰。试剂 D-HANKS液250ml，双抗2ml（青霉素16万U/ml链霉素15万U/ml），一型胶原酶，木瓜酶，BSA。后三种加上D-HANKS配成1ml的消化液，终浓度皆为1mg/ml。无血清DMEM和含20％FBS的DMEM 叁。步骤 1．  取大鼠，称重，水合氯醛0。3ml/100g腹腔麻醉 2．  绑好大鼠，先剪开腹腔，剪断腹部大动脉放血，后剪开胸腔，取肺 3．  放入烧杯，后移入超净台，置于冰盒上。以后的操作皆在冰盒上操作 4．  倒入已加双抗的D-HANKS，清洗肺部，扯掉食管，剪掉心脏 5．  用针头将肺固定在硅胶板上，硅胶板置于培养皿里 6．  用镊子将肺的内外膜除去，只剩下平滑肌 7．  用眼科剪将肺部剪成1－2mm的小碎块 8．  将碎块移入配好的消化液中，放入培养箱中，消化15min 9．  取出，加入无血清的DMEM，约10ml，移入离心管中 10．  980转/min，离心10min 11．  倒掉上清，加入约1ml含20％FBS的DMEM 12．  将碎块用滴管加入25ml的培养瓶里，液体不要加多，有种湿湿的感觉即可。一到两天可以再加点液体 13．  大概五到七天可以爬出