胰岛素受体对胰岛素亲和性的测定实验
材料与仪器牛血淸白蛋白 猪胰岛素 [125I]胰岛素（受体级） 结合缓冲液步骤材料[125I]胰岛素（受体级）（DuPontNENNEX196)猪胰岛素（如，S
材料与仪器
牛血淸白蛋白 猪胰岛素 [125I]胰岛素（受体级） 结合缓冲液
步骤
材料
[125I]胰岛素（受体级）（DuPontNENNEX196)
猪胰岛素（如，Sigma Chemical Co,I3505)
牛血淸白蛋白（BSA;1%)
试剂
结合缓冲液（冷配体置换实验用)
(配方，见 试剂的配制 PP.234~240)
操作程序
1)于微量离心管中建立下列反应体系：
2)各离心管置摇床上，室温下孵育2h。
3)各管用微型离心机离心20min,去上清。
4)用γ;-计数器计数离心管内的放射性强度。分别从第1至6管的cpm值中减去第7管的cpm值（非特异性cpm值和本底cpm值)，得特异结合的cpm值。
5)将各管的特异性结合cpm值除以总cpm值，得与膜结合的那部分胰岛素所占的份额。该值乘以各管中的胰岛素浓度，即得配体-受体复合物的浓度（[HR]，亦称[B],它表示结合的配体)。
6)从管中的胰岛素浓度减去[HR],得游离配体的浓度（[H],亦称[F],它表示游离的配体)。
7)至此，可用几种方法分析所得的结果。如能用计算机程序，将数据直接代入下式则更好：
也可通过[HR]对log([H])作图来分析这些数据。此图应给出S型曲线。于是，可分别从[HR]的最大值和曲线的拐点得出受体总数和KD值（Klotz,1982)。第三种方法是用斯卡査德（Scatchard)图分析数据，斯卡査德图就是
所作的图。若只有一种类型的结合位点,则斯卡査德图为一直线。为作斯卡査德图，先要确定对应于每个[H]的[HR]/[H]值，然后以[HR]/[H]值对[HR]作图,此线的斜率为-1/KD，横坐标的截距力受体总数([R]t)。若有多于一种类型的结合位点,且有不同的亲和性时，斯卡査德图将是一条曲线而不是直线。
[125I]胰岛素（受体级）（DuPontNENNEX196)
猪胰岛素（如，Sigma Chemical Co,I3505)
牛血淸白蛋白（BSA;1%)
试剂
结合缓冲液（冷配体置换实验用)
(配方，见 试剂的配制 PP.234~240)
操作程序
1)于微量离心管中建立下列反应体系：
2)各离心管置摇床上，室温下孵育2h。
3)各管用微型离心机离心20min,去上清。
4)用γ;-计数器计数离心管内的放射性强度。分别从第1至6管的cpm值中减去第7管的cpm值（非特异性cpm值和本底cpm值)，得特异结合的cpm值。
5)将各管的特异性结合cpm值除以总cpm值，得与膜结合的那部分胰岛素所占的份额。该值乘以各管中的胰岛素浓度，即得配体-受体复合物的浓度（[HR]，亦称[B],它表示结合的配体)。
6)从管中的胰岛素浓度减去[HR],得游离配体的浓度（[H],亦称[F],它表示游离的配体)。
7)至此，可用几种方法分析所得的结果。如能用计算机程序，将数据直接代入下式则更好：
也可通过[HR]对log([H])作图来分析这些数据。此图应给出S型曲线。于是，可分别从[HR]的最大值和曲线的拐点得出受体总数和KD值（Klotz,1982)。第三种方法是用斯卡査德（Scatchard)图分析数据，斯卡査德图就是
所作的图。若只有一种类型的结合位点,则斯卡査德图为一直线。为作斯卡査德图，先要确定对应于每个[H]的[HR]/[H]值，然后以[HR]/[H]值对[HR]作图,此线的斜率为-1/KD，横坐标的截距力受体总数([R]t)。若有多于一种类型的结合位点,且有不同的亲和性时，斯卡査德图将是一条曲线而不是直线。
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