动物组织甲苯胺蓝染色步骤

一、甲苯胺蓝染色实验原理与准备

甲苯胺蓝染色原理:甲苯胺蓝(Toluidine Blue)是一种常用的人工合成染料，属于醌亚胺染料类。这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。

甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用，组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝不仅含有两个发色团，还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类，帮助发色团对组织产生染色力，使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。甲苯胺蓝染色液(Toluidine Blue,1%,硼酸盐法)由于硼酸盐缓冲液呈强碱性，更利于组织细胞的着色。

仪器准备:生物组织摊烤片机、切片机、显微镜、盖玻片、载玻片

试剂准备:甲苯胺蓝染色液、中性树胶、无水乙醇、二甲苯

二、甲苯胺蓝染色实验步骤(以动物组织为例)

1、脱蜡

(1)70℃烤片5mini

(2)二甲苯(I)中脱蜡10min;

(3)二甲苯(II)中脱蜡10min;

(4)100%乙醇(1)中5min洗去二甲苯;

5) 100%乙醇(Ⅱ)中5min洗去二甲苯;

2、水化

(1)95%乙醇中水化1min;

(2)85%乙醇中水化1min;

(3)75%乙醇中水化1min;

(4)蒸馏水中水化待用;

3、染色

(1)甲苯胺蓝染色液染色30 min;

(2)流水冲洗2min;

(3)1%盐酸酒精分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见;

(4)流水冲洗切片5min;

(4)蒸馏水过洗1-2 s

4、脱水

(1)85%乙醇脱水1min;

(2)95%乙醇脱水1min;

(3)无水乙醇脱水1min;

(4)无水乙醇脱水1min;

5、透明

(1)二甲苯(I)透明2min;

(2)二甲苯(II)再次透明2min;

6、封片、镜检

在石蜡切片的中央滴加一滴中性树胶，盖上盖玻片封固，显微镜下观察拍照。