RIP检测样本制备注意事项

一、样本准备前注意事项

1、取样的代表性

所采集的样本应该通过严格的细胞学、组织学、病理学等相关鉴定，因为这关系到实验最终结果是否具有科学意义，所以客户须根据实验目的设计相关科学取样方案和取样步骤。

2、取样的准确性

正常组织样本中不能含有病变组织，而病理组织样本中也不可以夹带有正常组织。

在条件允许的前提下，争取做到实验组与对照组的样本在取材时间、部位、处理条件等方面尽可能保持一致，否则可能会影响实验结果的重复性和可信度。代表性样本的各种特征数据必须被准确记录，并按要求（低温、迅速）采集、制备、贮存、运输进行实验处理。

3、取样的重复性

生物学重复的取样应尽量减少重复间样品的差异。在条件允许的前提下，做到重复样本在取材时间、部位、处理条件等方面尽可能保持一致，可以使用同一个体

的作为重复的尽量选用同一个体，不能使用同一个体的应保证父母本、雌雄（性别）、年龄相同，否则可能会影响实验结果的重复性和可信度。

4、取样的及时性

样本质量是影响实验结果的最关键因素，因此用于研究的实验样本，在采集、贮存、运输和制备的过程中尽可能地做到迅速，最大限度的缩短从样本采集到实验的时间。

5、取样的低温性

所取样本离体后，经快速清洗和标记等处理后，应立即投入液氮中速冻至少30分钟，之后保存于-80℃冰箱或者干冰中，确保在实验操作前样品始终处于-80℃，以避免蛋白的降解。

二、RIP检测样本取样方法

1、组织、细胞、微生物等样本准备与保存方法

（1）动物组织

A.取下新鲜组织，应剔除结缔组织和脂肪组织等非研究所需的组织类型；

B.迅速用预冷的0.9％生理盐水漂洗将组织表面的残留血液冲洗干净；

C.如果组织体积较大，尽量将组织切成长宽高均≤0.5cm的小块（即黄豆大小）；

D.将处理好的组织样本混合均匀后保存于10 ml或更大体积的旋盖冻存管中，准确标记；

E.迅速置于液氮中冷冻30分钟，然后转移至-80℃或液氮中保存；

F.运送方式：将冻存管置于50ml离心管中或密封性好的塑料袋中，干冰运输。

（2）植物组织

A.从植物体上，取下新鲜组织。大田或野外获取的材料，取材后需将材料表面的灰尘或泥土冲洗干净，吸干。

B.如果组织体积较大，应尽量将组织剪切成小块，然后将组织放入10ml或更大体积的冻存管中，或者使用锡箔纸包严后放入自封袋，准确标记；

C.迅速置于液氮中冷冻30分钟，然后转移至-80℃或液氮中保存；

（3）肿瘤组织

A.对肿瘤组织的取材，应尽可能准确地判定肿瘤和正常组织，如果有可能请根据冰冻切片报告的结果来判断要进行研究的取材部位，肿瘤组织应将周围的正常组织切除干净（正常组织也应将周围的肿瘤组织切除干净）；

B.离体后请立即分割组织，约2-3 mm厚，然后将组织放入2.0 mL或更大体积旋盖冻存管中；

C.迅速置于液氮中冷冻30分钟，然后转移至-80℃或液氮中保存；

D.运送方式：将冻存管放置于50ml离心管中或密封性好的小塑料袋中，干冰运输；

（4）细胞样品

A.贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，并用PBS缓冲液（无Rnase配制）清洗两次，3,000 rpm/min/4℃离心5min，倒尽上清，准确标记；

B.迅速置于液氮中冷冻30分钟，然后转移至-80℃或液氮中保存；

C.运送方式：将冻存管放置于50ml离心管中或密封性好的小塑料袋中，干冰运输；