Southern Blot印迹杂交实验介绍

  Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。其基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则特异性地杂交形成双链。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量。

Southern印迹杂交技术包括两个主要过程：一是将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，即印迹（blotting）；二是固定于膜上的核酸与同位素标记的探针在 一定的温度和离子强度下退火，即分子杂交过程。

      印迹方法如电转法、真空转移法；滤膜发展了尼龙膜、化学活化膜（如APT、ABM纤维素膜）等。

      Southern Blot实验主要应用在以下方面：

1、遗传病诊断

2、DNA图谱分析

3、检测样品中的DNA及其含量

4、PCR产物分析

Southern Blot实验大概步骤：

1、待测核酸样品的制备

2、 琼脂糖凝胶电泳分离待测DNA样品

3、电泳凝胶预处理

4、转膜

5、探针标记

6、预杂交（prehybridizafion）

7、Southern杂交

8、洗膜

9、放射性自显影检测