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细胞技术

细胞培养的基本技术

2025-03-10 细胞技术 加入收藏
一、清洗 新采用和重新使用的培养器皿,都要严格清洗,以防各种有害物质对培养细胞损害。培养用的塑料器皿目前主要依靠进口,均已无菌密封包装,可直接使用。对于塑料瓶盖

一、清洗 新采用和重新使用的培养器皿,都要严格清洗,以防各种有害物质对培养细胞损害。培养用的塑料器皿目前主要依靠进口,均已无菌密封包装,可直接使用。对于塑料瓶盖或胶塞等,可水中浸泡后用2%NaOH煮沸10~20min,自来水中浸泡和蒸馏水漂洗2~3次,晾干备用。细胞培养中的绝大部分器皿系玻璃制品,清洗过程为以下步骤。 1. 浸泡 新使用或重复使用的玻璃器皿须经5%盐酸溶液或自来水浸泡过夜或煮沸30min,水洗。以去除新购进玻璃器皿所带有灰尘、铅、砷等物质,并消除其弱碱性。 2. 刷洗 浸泡后用软毛刷和优质的洗洁精进行刷洗。 3. 酸浸 刷洗后的玻璃制品酸浸前须适当晾干或烘干,以免造成酸浸液稀释,影响效果。将玻璃制品完全浸泡入清洁液中24h。清洁液具有极强酸蚀作用,操作过程需戴防护用具。 4. 冲洗 浸酸后的玻璃器皿先用自来水充分冲洗,吸管需冲洗10min,器皿需每瓶灌满自来水、倒掉反复10次以上,不留任何酸浸液残迹,然后用蒸馏水漂洗2~3次,烘干备用。要求干净透明,无油烟,不能残留任何有害物质及化学药品等。 二、消毒 1. 包装 器材经清洗烤干或晾干后,先应严格包装,然后再行消毒灭菌处理,以防止消毒灭菌后再次遭受污染。包装材料常用包装纸、牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、玻璃或金属制吸管筒、纸绳等。 2. 消毒 消毒灭菌随物品的不同,而采用不同的方法。 (1)紫外线:主要用于消毒实验室空气、工作台面和一些不能使用其他方法消毒的培养器皿。进无菌室前或做完实验后,均应开灯照射30min进行消毒。紫外线照射60min可以消灭空气中大部分细菌。 (2)消毒剂:操作者的皮肤、培养瓶的盖和外壁常用碘酒、酒精消毒。无菌室内桌椅和物体的消毒可用0.1%新洁尔灭、过氧乙酸、来苏儿等擦拭或浸泡。实验室、无菌室的消毒可用甲醛熏蒸(高锰酸钾5~7.5g,加40%甲醛10~15ml,混合放入一开放容器内,立即可见白色甲醛烟雾,房间密闭24h即可)。 (3)干热消毒:多用于玻璃器皿消毒,干热烤箱180℃45~60min。 (4)湿热消毒:培养液、橡胶制品、塑料器皿等用68kPa(115℃)高压灭菌10min;布类、玻璃制品、金属器械等用103kPa(121.3℃)高压灭菌15~20min。 (5)滤过消毒:用孔径200~450nm大小的滤板可除去培养液和 试剂 中的细菌和霉菌等。用200nm孔径的滤板通过两次,可使支原体达到某种程度的去除,但不能除去病毒。滤器分为负压和加压式两种。过滤的液体量很少时,可选用注射器微量滤膜滤器。 (6)60Co照射:不耐热的塑料制品或一次性用品的灭菌可经包装后,用γ射线照射消毒。 三、无菌操作 无菌操作是防止污染、决定培养是否成功的首要条件。由于体外培养细胞缺乏抗感染能力,在一切操作中要努力做到最大限度的无菌。工作前对手部需清洗消毒,进无菌操作室时戴口罩和穿工作服。不能用手直接触及已消毒器皿内部。打开培养瓶前或封闭瓶口前须火焰烧灼瓶口等。

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