RNA的琼脂糖凝胶电泳实验
原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%~1.4%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下，R
原理
RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%~1.4%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。
材料与仪器
RNA样品溶液
琼脂糖 TAE电泳缓冲液 溴化乙锭 载样缓冲液 MOPS缓冲液
电泳仪 电泳槽 电子天平 移液器 枪头 微波炉 紫外透射检测仪 封口膜
琼脂糖 TAE电泳缓冲液 溴化乙锭 载样缓冲液 MOPS缓冲液
电泳仪 电泳槽 电子天平 移液器 枪头 微波炉 紫外透射检测仪 封口膜
步骤
一、实验材料、器具及药品
蘑菇的总RNA溶液。 电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。 琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，0.5 ug/ml溴化乙锭（EB）10X载样缓冲液。
二、实验步骤
1. 用1xTAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1xTAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。
2. 在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4 ul于封口膜上。在实验台上再加入5 ul 1xTAE电泳缓冲液及1 ul 的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。
3. 打开电源开关，调节电压至100 V，使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色5 min，用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。
三、 RNA的变性琼脂糖凝胶检测
1. 试剂
（1）MOPS缓冲液（1undefined）:0.4 mol/L 吗啉代丙烷磺酸（MOPS） (pH7.0)，0.1 mol/L NaAc，10 mol/L EDTA。
（2）上样染料：50%甘油，1 mmol/L EDTA ，0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝。
（3）甲醛。
（4）去离子甲酰胺。v电泳槽清洗：去污剂洗干净（一般浸泡过夜）水冲洗-乙醇干燥-3%H2O2灌满-室温放置10分钟-0.1%DEPC水冲洗。
2. 操作
（1） 将制胶用具用70%乙醇冲冼一遍，晾干备用。
（2） 配制琼脂糖凝胶。
①称取0.5 g琼脂糖，置干净的100 ml 锥形瓶中，加入40 ml蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。
②待胶凉至60--70 ℃，依次向其中加入9 ml 甲醛、5 ml 10X MOPS缓冲液和0.5 ul 溴化乙锭，混合均匀。
③灌制琼脂糖凝胶。
（3） 样品准备：
① 取 DEPC处理过的500 ul小离心管，依次加入如下试剂： 10x MOPS缓冲液2 ul，甲醛3.5 ul，甲酰胺（去离子）10 ul，RNA 样品 4.5 ul，混匀。
② 将离心管置于60℃水浴中保10分钟，再置冰上2分钟。
③ 向管中加入3 ul 上样染料，混匀。
（4）上样。
（5）电泳：电泳槽内加入1XMOPS缓冲液，于7.5 V/ml 的电压下电泳。
（6）电泳结束后，在紫外灯下检查结果。
注意事项
RNA琼脂糖凝胶电泳中务必去除RNASE酶的污染，所有的试剂需用DEPC水配制，所用的器材也要的DEPC处理并灭菌，防止RNA被降解。
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