常用的转染方法
转染方法原 理应 用特 点二乙氨乙基(DEAE)-右旋糖酐法带正电的DEAE-葡聚糖(dextran) 与带负电的核酸磷酸骨架相互作用形成复合物,通过细胞内吞作
| 转染方法 | 原 理 | 应 用 | 特 点 |
| 二乙氨乙基(DEAE)-右旋糖酐法 | 带正电的DEAE-葡聚糖(dextran) 与带负电的核酸磷酸骨架相互作用形成复合物,通过细胞内吞作用进入细胞 | 瞬时转染 | 相对简便,结果可重复,但对细胞有一定的毒副作用,转染时需去除血清 |
| 磷酸钙法 | 磷酸钙-DNA 复合物吸附于细胞膜,被细胞内吞稳定转染, | 瞬时转染 | 操作简便,但重复性差,不适用于原代细胞及某些培养细胞 |
| 阳离子脂质体法 | 带正电的脂质体与带负电的核酸磷酸骨架形成复合物,被细胞内吞 | 稳定转染 瞬时转染, | 适用于所有细胞,转染效率高,重复性好,但转染时需去除血清,转染效果随细胞类型变化大 |
| 非脂质体脂类法 | 内含多种脂质成分,与DNA 结合后转运到细胞内 | 瞬时转染稳定转染 | 适用于所有细胞,包括许多原代培养细胞;转染效率高,细胞毒性小,转染时可以不去除血清 |
| 逆转录病毒介导法 | 通过感染宿主细胞将外源基因整合到染色体中 | 稳定转染 | 可用于难转染的细胞,如原代细胞、体内细胞等。但携带基因不能太大,操作复杂,耗时,需考虑安全因素。 |
| 腺病毒介导法 | 通过感染宿主细胞将外源基因整合到染色体中 | 瞬时转染特定宿主细胞 | 可用于难转染的细胞,需考虑安全因素 |
| 电穿孔法 | 高脉冲电压破坏细胞膜电位,DNA 通过膜上形成的小孔导入 | 稳定转染, 瞬时转染 | ,适用于所有细胞,但细胞致死率高,DNA 和细胞用量大,需根据不同细胞类型优化实验条件 |
| 基因枪法将 | DNA 用显微重金属颗粒沉淀,再将包被好的颗粒用弹道装置射入细胞,DNA 在胞内逐步释放、表达 | 瞬时转染 | 可用于人的表皮细胞、成纤维细胞、淋巴细胞系及原代细胞 |
| 显微注射法 | 通过显微操作将DNA 直接注入靶细胞核稳定转染, | 瞬时转染 | 转染细胞数有限,多用于基因工程改造或转基因动物的胚胎细胞 |
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