聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)分离血清蛋白质(核黄素-TEMED聚合系统)

1．学习聚丙烯酰胺凝胶电泳原理。 2．掌握聚丙烯酰胺园盘电泳的操作技术。 3．比较醋酸纤维薄膜电泳与本法分离血清蛋白质的效果。 二、原理： （一）盘状电泳原理 盘状电泳是在区带电泳原理的基础上，以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物，采用电泳基质的不连续体系（即凝胶层的不连续性、缓冲液离子成分的不连续性、pH的不连续性及电位梯度的不连续性），使样品在不连续的两相间积聚浓缩成很薄的起始区带（厚度为10-2厘米），然后再进行电泳分离。 盘状电泳名称来源即由于此法的原理是依靠基质不连续性（discontinuity），凑巧分离出的区带也很象圆盘状（discoid shape），取“不连续性”及“圆盘状”的英文字头“disc”。因此，英文名称为disc electrophoresis，中文直译为盘状电泳。 仪器 装置：（见图15-1）。上下两个槽为圆形或方形，其中注入缓冲液。上下槽的缓冲液中分别有正、负电极通入。上槽底部有很多小孔，可插入装有聚丙烯酰胺凝胶的玻璃管。

这里仅以Davis和Orstein（1964）用分析血清蛋白的高pH的不连续系统为便 说明其基本原理。此系统是一个高pH的碱性系统，或称阴离子系统，最初用于分析血清蛋白，但也适用于其他的酸性和中性蛋白。很多细胞蛋白质，或病毒的结构蛋白在此系统中（pH8—9）解离成阴离子，向阳极移动。系统由下列三种不连续的凝胶组成。即在每支玻璃管中装有三层不同的凝胶（见图15-2）。最上层为样品胶，中层为浓缩胶（又称间隔胶或积层胶），下层为分离胶（又称电泳胶）。