关于RNA提取的几个问题

RNA快速提取程序 　　组织RNA的提取： 将约10～100 mg的组织块置于匀浆仪中，加入1 ml RNA快速提取 试剂 ，进行匀浆；将匀浆液倾入1.5 ml 离心管 中，加入0.1体积的氯仿，振荡混合20 s；冰上放置5 min；4℃离心12　000 r. min－1 , 15 min。 离心管 中的液体分为3层: 上层为无色透明的无机相，RNA保留于此相中；下层为呈淡黄色的有机相，蛋白质保留于此相中；上下两层的界面处为中间层，DNA 保留于此相中。小心吸取上层水相约0.5 ml于新管中，切勿吸取中间层和下层液体，以避免DNA 和蛋白质的污染。异丙醇沉淀：加入等体积的－20℃预冷的异丙醇，混匀，4℃离心12　000 r. min－1 ，15 min, 弃上清；用0.5 ml预冷的80％(体积分数)乙醇洗涤沉淀，弃尽乙醇，在空气中自然干燥，溶于适量DEPC处理的水中，用于后续的实验或－80℃保存。

RNA的质量、纯度鉴定和浓度测定 　　取1～2 μl RNA样品在15 g. L－1 琼脂糖凝胶上进行电泳 ，检查RNA的质量，主要观察28　S、18　S和5　S三条带是否清晰，有无降解，以及是否有DNA 污染。 　　取1～2 μl RNA样品溶于1　ml超纯水中，用紫外分光光度法测定D值。以D260 值计算其浓度，计算公式: 　　质量浓度(g. L－1 )=40×D260 ×稀释倍数/1000 　　以D260 /D280 的比值表示其纯度，比值在1.8～2.0之间为纯的RNA，比值低于1.8，说明RNA样品有蛋白质或酚的污染，需要用氯仿重新抽提。

匀浆方式对RNA质量的影响 　　在实验中我们发现不同的匀浆方式对RNA的质量有明显的影响。通过反复实验发现，用超声匀浆仪匀浆易引起RNA的降解，且RNA的回收率很低；用手动玻璃匀浆器进行组织匀浆，获得的RNA无降解，回收率高，而且操作简单，是一种较理想的组织匀浆方式。