植物病毒RNA提取

 大多植物病毒RNA为单链RNA，并且其极性与mRNA极性相同，植物病毒RNA提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。 　　一、材料 　　提纯TMV病毒液（10mg/ml）。 　　二、设备 　　冷冻台式离心机，低温真空干燥仪，电泳仪，电泳槽。 　　三、 试剂 　　TE-饱和酚:氯仿（1:1），氯仿，3M NaAc(pH5.2)，乙醇(100%和70%)，TE缓冲液，无RNA酶的双菌水。 　　四、操作步骤 　　1、取一eppendorf管加入提纯TMV（10mg/ml）400ml，再加入等体积酚/氯仿，盖紧管盖后用手充分振荡1分钟，4℃下12000g离心10分钟。 　　2、吸取水相于一新eppendorf管，再用酚/氯仿抽提，直至水相和有机相交界面无蛋白为止。 　　3、吸取水相于新eppendorf心管，加入等体积氯仿，用手倒置 离心管 数十秒，4℃下12000g离心10分钟。 　　4、取水相，加入1/10倍体积的3mol/L NaAc(pH5.2)，2.5倍体积的冰冷乙醇，混匀，-20℃30分钟。 　　5、4℃下12000g离心15分钟，小心弃去上清液，用70%乙醇洗涤沉淀，4℃下12000g离心5分钟。 　　6、小心弃去上清液，沉淀真空干燥5分钟或空气干燥10分钟，并溶于无RNA酶的双菌水或TE 缓冲液 中。 　　7、取10ml进行电泳分析，另10ml用于cDNA合成。 　　[注意] 1、整个操作应尽可能在低温下进行。 　　2、由于病毒RNA镶嵌于外壳蛋白里面，因此要充分剥去病毒外壳蛋白，一般需要多次进行酚/氯仿的抽提。