禽流感实验室检测技术方案

一、实验室网络设置

实验室网络由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心和省级流感实验室两级组成。

二、实验室条件及生物安全操作的要求

1．省级流感实验室实验条件及生物安全的操作要求

（1）实验生物安全要求：安全Ⅱ级+（BSL-2 级+）或安全Ⅲ级（BSL-3 级）。

（2）特异性H5 的 RT-PCR 病毒核酸检测、血清学检测中用到的血凝抑制实验（HI）可以在安全Ⅱ级+（BSL-2 级+）实验室里操作。

（3）特异性H5 的 RT-PCR 病毒核酸检测在安全Ⅱ级+（BSL-2级+）实验室的生物安全柜里提取病毒的核酸，进行病毒核酸检测的实验室要求请参照国家有关核酸检测要求的规定。

（4）微量中和实验、特异性H5 的 RT-PCR 病毒核酸检测阳性的采样标本的病毒分离、尸检标本的检测必须在安全Ⅲ级（BSL-3 级）实验室里操作。

（5）省级流感实验室实验条件：具备进行禽流感相关临床标本初筛所需的生物安全柜、离心机、PCR 仪、电泳仪、紫外线检测仪等配套设备。

2．国家流感中心

实验生物安全要求：生物安全Ⅱ级+（BSL-2 级+）和生物安全Ⅲ级（BSL-3 级）实验室。

3．省级流感实验室职责

（1）禽流感采样标本的临床标本特异性H5 的 RT-PCR 病毒核酸检测；

（2）禽流感H5 的血清学检测工作;

（3）特异性H5 的 RT-PCR 病毒核酸检测阳性标本的病毒分离必须在生物安全Ⅲ级（BSL-3 级）实验室；

（4）没有生物安全Ⅲ级（BSL-3 级）实验室的，将标本送国家流感中心做病毒的分离工作。

4．国家流感中心实验室职责

（1）国家流感中心设立在中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所流感室；

（2）对各省报告的禽流感疑似病例或确诊病例进行复核、确认；

（3）对不具备禽流感病毒分离条件的省份送检标本的检测、分离和确认；

（4）对需要做微量中和实验的血清标本进行微量中和试验；

（5）对各省级实验室检测人员的培训；

（6）对各省级流感实验室的质量控制。

三、原始标本采集

1．标本采集人员

医疗机构的医生、护士或当地疾病预防控制中心专业人员负责标本采集并填写标本登记表，标本采集人员按照《禽流感职业暴露人员防护原则》做好个人防护。

2．标本采集种类和时限

（1）采集标本的种类：疑似禽流感患者的咽、鼻拭子或含漱液、血清以及死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物。

（2）采集标本时间：

1）咽、鼻拭子或含漱液在发病的头3 天采集；

2）急性期血清在发病后7 天内采集，恢复期血清在发病后2-4周采集；

3）尸检标本尸检时采集。

3．标本的运送

所有采集的标本应在医院采集时立即分装，一式二份，其中一份单独保存，以备复核。采集的标本若不能在24 小时内送达，则应尽快在－70 ℃以下保存。无－70 ℃条件的需在－20℃冰箱短时间暂存，并尽快联系递送标本。

4．标本采集的方法

详见国标《流行性感冒诊断标准及处理原则》