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SDS-PAGE凝胶制实验及其各实验试剂的配制方法

2024-11-20 蛋白质 加入收藏
SDS-Page 凝胶制备属于实验室最常规的操作了,刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方,这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯

SDS-Page 凝胶制备属于实验室最常规的操作了,刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方,这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。

1. 分离胶(12%)

配制所需试剂所需体积
分离胶(12%)30%丙烯酰胺6.0 ml
1.5 mol/l Tris-HCl3.8 ml
10%SDS150 μl
10%过硫酸铵150 μl
TEMED6 μl
蒸馏水4.9 ml

2. 浓缩胶(5%)

配制所需试剂所需体积
浓缩胶(5%)30%丙烯酰胺1.3 ml
1.5 mol/l Tris-HCl1.0 ml
10%SDS80 μl
10%过硫酸铵80 μl
TEMED8 μl
蒸馏水5.5 ml

3. 分离胶缓冲液(pH8.9)

配制所需试剂所需体积
分离胶缓冲液Tris36.6 g
1 mol/l HCl48 ml
蒸馏水补足至100 ml









4. 浓缩胶缓冲液(pH6.7)

配制所需试剂所需体积
浓缩胶缓冲液(pH6.7)Tris5.98 g
1 mol/l HCl48 ml
蒸馏水补足至100 ml









5. 30%丙烯酰胺(pH≤7.0)

配制所需试剂所需体积
30%丙烯酰胺(pH≤7.0)丙烯酰胺29 g
甲叉-双丙烯酰胺1 g
蒸馏水补足至100 ml









6. 10%过硫酸铵(W/V):1g过硫酸铵溶于10ml水中,4℃保存数周,尽量现用现配。

7. 10%SDS:将10 g SDS溶于80ml重蒸水中并轻缓搅拌(室温低时需水浴加热溶解),再定容至100ml,室温存放。

8. 样品缓冲液

配制所需试剂所需体积
样品缓冲液1 M Tris-HCl(pH6.7)5 ml
SDS2.5 g
巯基乙醇1 ml
溴酚兰0.05 g
蔗糖10 g
蒸馏水补足至100ml

9. 考马斯亮蓝染色液:0.25g考马斯亮蓝R-250用少量甲醇溶解后,用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀释至100ml。

10. Tris-甘氨酸电泳缓冲液(pH8.3)

配制所需试剂所需体积
Tris-甘氨酸 电泳缓冲液(pH8.3)Tris碱15.1 g
甘氨酸94 g
10%(W/V)SDS50 ml
去离子水补足至100 ml






凝胶配制所需试剂的母液不能放置太久,有条件的实验室可将母液保存在4度冰箱中,放置母液被微生物 污染或者出现沉淀。


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