蛋白提取操作时的注意事项

避免蛋白降解

z 总体规则：蛋白酶普遍存在，在提取蛋白质的步骤中，早些抑制，经常抑制

z 分装蛋白溶液，储存于不同的温度和不同的缓冲液中，测蛋白活性，找出最适储存条件。

z 冷藏，并加入稳定剂。这些稳定剂一般都能充分保持蛋白的 生物 学活性。

z 将蛋白溶液储于50%（V/V)的甘油或悬于硫酸铵（3.2M）中，避免冻存

z 冰结晶会造成物理剪切及蛋白变性。

z 避免酶的反复冻融，如果酶需要冻存，分装成小管后冻存。

蛋白质的储存

z 蛋白样品在液氮中速冻，拿出后加入10-20%的甘油，长期储存

z 整个实验过程中，都要将蛋白样品置于冰上

z 从母管中吸取不同的蛋白时，都要用新鲜的枪头

z 不要将未用的溶液倒回母管

z 戴手套操作，避免蛋白交叉污染，或是 蛋白酶 的污染

z 避免剧烈的震荡，避免溶液中混入蛋白变性剂

z 实验的过程中应避免灰尘进入，灰尘包含60%的肌氨酸

操作过程中

z 操作时总是小体积小量的操作，避免污染，并且动作要快

a：此类蛋白酶在活性中心包含丝氨酸和组氨酸。

b：此类蛋白酶在活性中心包含半胱氨酸（巯基，-SH - ）。

c：此类蛋白酶在活性中心包含金属离子（如：Zn 2+ ，Ca 2+ ，Mn 2+ ）。

d：此类蛋白酶在活性中心包含天冬氨酸族。